公开(公告)号：CN105567766A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610060896.1

申请日：2016-01-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张立奎 ,  黄彦超 ,  杨立翔 ,  徐家俊

IPC: C12P19/34 ,  C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70

CPC classification number: C12P19/34 ,  C12N9/16

Abstract: 本发明提供一种使用耐热重组HNH型核酸内切酶切割DNA的方法，包括以下步骤：1)以深海嗜热噬菌体GVE2基因组为模板进行PCR扩增；2)对PCR扩增产物和pET-30a载体进行双酶切反应；3)回收酶切后的PCR产物和pET-30a载体片段后进行连接反应；4)将连接产物转化到感受态细胞中后，挑取克隆，并测序验证；5)将基因序列正确的克隆质粒转化到感受态细胞中进行诱导表达；6)提取并纯化该耐热重组核酸内切酶；7)使用获得的GVE2HNH型核酸内切酶切割DNA：切割反应温度大于60℃，切割反应pH值大于5.5。该耐热重组核酸内切酶活力高，能够在大于60℃的高温条件下无特异性地切割DNA，在分子生物学、疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业等涉及到核酸去除的催化领域有着广阔的应用前景。