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公开(公告)号：CN106929489B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201611256575.5
申请日：2017-03-08
申请人： 徐州工程学院
摘要： 本发明公开了一种耐热耐酸葡萄糖氧化酶的发酵制备及分离纯化方法，属于微生物技术领域。该发酵制备得到葡萄糖氧化酶具有高的耐热性和耐酸性，解决了在食品及饲料中因高温及酸性环境中使用导致的酶活力低的缺陷。具体步骤如下：将菌种培养成孢子并将孢子清洗后制备单孢子菌悬液；将单孢子菌悬液接入种子培养基中发酵培养；将种子培养液接入摇瓶发酵培养基中发酵培养，将发酵补充营养液加入发酵液中；糊精、可溶性淀粉及山梨酸钾加入发酵液中并搅拌均匀，将发酵液冷冻，干燥并粉碎，得葡萄糖氧化酶。发酵得到的葡萄糖氧化酶粗酶液经过热处理、硫酸铵‑乙醇复合沉淀及离子交换层析和分子筛凝胶过滤层析，得到高回收率高纯度的葡萄糖氧化酶。
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公开(公告)号：CN106978404B
公开(公告)日：2020-06-26
申请号：CN201611258642.7
申请日：2016-12-30
申请人： 徐州工程学院
摘要： 本发明公开了一种深层液体发酵制备葡萄糖氧化酶酶制剂的方法，属于微生物技术领域，包括如下步骤：发酵菌种的活化，制备嗜热拟青霉孢子悬液，一级嗜热拟青霉种子液的制备，葡萄糖氧化酶的搅拌式发酵罐发酵，葡萄糖氧化酶酶液的提纯和浓缩，葡萄糖氧化酶酶液的冷冻干燥；其中，一级嗜热拟青霉种子液的制备，葡萄糖氧化酶的搅拌式发酵罐发酵，葡萄糖氧化酶酶液的提纯和浓缩，葡萄糖氧化酶酶液的冷冻干燥等步骤为创新点所在；各步骤中所用培养基的原料均为农副产品。本发明所提供的生产方法的生产效率高，成本较低，有利于工业化生产；且该生产方法制备的葡萄糖氧化酶具有耐高温、耐酸、酶活性强、酶回收率高等优点。
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公开(公告)号：CN107201347B
公开(公告)日：2020-07-17
申请号：CN201611261011.0
申请日：2016-12-30
申请人： 徐州工程学院
IPC分类号： C12N9/04 , A23K50/75 , A23K20/189 , C12R1/79
摘要： 本发明公开一种固态发酵制备耐热耐酸葡萄糖氧化酶的方法及应用，属于微生物技术领域。所述方法包括如下步骤，步骤1：菌种制备；步骤2：嗜热拟青霉三角瓶固态发酵；步骤3：嗜热拟青霉曲盘固态发酵；步骤4：葡萄糖氧化酶酶制剂制备。本发明在嗜热拟青霉的固态发酵过程中进行阶段性补充液态营养料，并根据菌体生长特点和产酶特点，发酵过程调整发酵参数分阶段控制，与采用普通固态发酵法相比，该方法生产制得的产物葡萄糖氧化酶活力提高了45％左右，且葡萄糖氧化酶稳定性好，酶的耐酸性强，本发明发酵培养基原料低廉，主要为普通农副产物麸皮、玉米秸秆粉、玉米粉、豆粕、蛹虫草栽培后废弃培养基，培养成本低。
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公开(公告)号：CN107201347A
公开(公告)日：2017-09-26
申请号：CN201611261011.0
申请日：2016-12-30
申请人： 徐州工程学院
IPC分类号： C12N9/04 , A23K50/75 , A23K20/189 , C12R1/79
摘要： 本发明公开一种固态发酵制备耐热耐酸葡萄糖氧化酶的方法及应用，属于微生物技术领域。所述方法包括如下步骤，步骤1：菌种制备；步骤2：嗜热拟青霉三角瓶固态发酵；步骤3：嗜热拟青霉曲盘固态发酵；步骤4：葡萄糖氧化酶酶制剂制备。本发明在嗜热拟青霉的固态发酵过程中进行阶段性补充液态营养料，并根据菌体生长特点和产酶特点，发酵过程调整发酵参数分阶段控制，与采用普通固态发酵法相比，该方法生产制得的产物葡萄糖氧化酶活力提高了45％左右，且葡萄糖氧化酶稳定性好，酶的耐酸性强，本发明发酵培养基原料低廉，主要为普通农副产物麸皮、玉米秸秆粉、玉米粉、豆粕、蛹虫草栽培后废弃培养基，培养成本低。
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公开(公告)号：CN107201315A
公开(公告)日：2017-09-26
申请号：CN201611260984.2
申请日：2016-12-30
申请人： 徐州工程学院
CPC分类号： C12R1/79 , C12N1/14 , C12N9/0006 , C12N13/00 , C12N15/01 , C12Y101/03004
摘要： 本发明公开了一株嗜热拟青霉(Paecilomyces thermophila)诱变菌株及其诱变方法和应用，该菌株以高温发酵的堆肥中筛选出的产耐高温耐酸的葡萄糖氧化酶的嗜热拟青霉为出发菌株，经原生质体紫外线和甲基磺酸乙酯复合诱变后，筛选出的菌株再通过出芽孢子硫酸二乙酯‑微波复合诱变获得的。本发明的诱变菌株已于2016年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13182。本发明中菌株诱变方法比常规诱变方法效率高，筛选过程简单快速，诱变菌株的生产能力更高，产量为嗜热拟青霉出发菌株产量的277.65％，发酵液酶活达到185U/ml，降低了生产成本，且该菌株生产的葡萄糖氧化酶耐高温、耐酸性好，可作为饲用酶应用于饲料行业。
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公开(公告)号：CN106978404A
公开(公告)日：2017-07-25
申请号：CN201611258642.7
申请日：2016-12-30
申请人： 徐州工程学院
摘要： 本发明公开了一种深层液体发酵制备葡萄糖氧化酶酶制剂的方法，属于微生物技术领域，包括如下步骤：发酵菌种的活化，制备嗜热拟青霉孢子悬液，一级嗜热拟青霉种子液的制备，葡萄糖氧化酶的搅拌式发酵罐发酵，葡萄糖氧化酶酶液的提纯和浓缩，葡萄糖氧化酶酶液的冷冻干燥；其中，一级嗜热拟青霉种子液的制备，葡萄糖氧化酶的搅拌式发酵罐发酵，葡萄糖氧化酶酶液的提纯和浓缩，葡萄糖氧化酶酶液的冷冻干燥等步骤为创新点所在；各步骤中所用培养基的原料均为农副产品。本发明所提供的生产方法的生产效率高，成本较低，有利于工业化生产；且该生产方法制备的葡萄糖氧化酶具有耐高温、耐酸、酶活性强、酶回收率高等优点。
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公开(公告)号：CN106929489A
公开(公告)日：2017-07-07
申请号：CN201611256575.5
申请日：2017-03-08
申请人： 徐州工程学院
摘要： 本发明公开了一种耐热耐酸葡萄糖氧化酶的发酵制备及分离纯化方法，属于微生物技术领域。该发酵制备得到葡萄糖氧化酶具有高的耐热性和耐酸性，解决了在食品及饲料中因高温及酸性环境中使用导致的酶活力低的缺陷。具体步骤如下：将菌种培养成孢子并将孢子清洗后制备单孢子菌悬液；将单孢子菌悬液接入种子培养基中发酵培养；将种子培养液接入摇瓶发酵培养基中发酵培养，将发酵补充营养液加入发酵液中；糊精、可溶性淀粉及山梨酸钾加入发酵液中并搅拌均匀，将发酵液冷冻，干燥并粉碎，得葡萄糖氧化酶。发酵得到的葡萄糖氧化酶粗酶液经过热处理、硫酸铵‑乙醇复合沉淀及离子交换层析和分子筛凝胶过滤层析，得到高回收率高纯度的葡萄糖氧化酶。
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