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公开(公告)号：CN118581114A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410643178.1
申请日：2024-05-22
Applicant: 广州国家实验室
Abstract: 本发明提供重组核酸分子，所述核酸分子包含博卡病毒的全部基因组序列和HiBiT报告基因的编码序列。本发明提供博卡病毒感染性克隆，其带有HiBiT报告基因。本发明还提供博卡病毒感染性克隆的构建方法及其应用。本发明构建的HiBiT标签插在NS1N端的博卡病毒感染性克隆病毒复制能力与野生型相当，保证了其在病毒复制机制研究、药物筛选应用中的有效性和准确性。另外，本发明的感染性克隆的复制能力可以通过检测Nano‑Luc荧光素酶活性进行指征，在用于人博卡病毒抗病毒药物筛选和疫苗评价时，可以根据发光信号的强度直接判断病毒抑制效果，还可以用于计算抗病毒药物和疫苗的EC50值等。
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公开(公告)号：CN118581114B
公开(公告)日：2025-05-06
申请号：CN202410643178.1
申请日：2024-05-22
Applicant: 广州国家实验室
Abstract: 本发明提供重组核酸分子，所述核酸分子包含博卡病毒的全部基因组序列和HiBiT报告基因的编码序列。本发明提供博卡病毒感染性克隆，其带有HiBiT报告基因。本发明还提供博卡病毒感染性克隆的构建方法及其应用。本发明构建的HiBiT标签插在NS1N端的博卡病毒感染性克隆病毒复制能力与野生型相当，保证了其在病毒复制机制研究、药物筛选应用中的有效性和准确性。另外，本发明的感染性克隆的复制能力可以通过检测Nano‑Luc荧光素酶活性进行指征，在用于人博卡病毒抗病毒药物筛选和疫苗评价时，可以根据发光信号的强度直接判断病毒抑制效果，还可以用于计算抗病毒药物和疫苗的EC50值等。
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公开(公告)号：CN118652833A
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202410643231.8
申请日：2024-05-22
Applicant: 广州国家实验室
IPC: C12N5/071 , C12N7/00 , C12Q1/02 , A61K31/675 , A61P31/20
Abstract: 本发明涉及支持博卡病毒感染的细胞模型鉴定及其应用。本发明选择了29个分别来源于肾、肺、脑、淋巴细胞、肠、肌肉、甲状腺和乳腺的人细胞系，以及7个来源于小鼠、猴子、狗、猪和牛的动物细胞系进行评估，发现与Caco‑2细胞相比，只有HT‑29和MA104细胞胞内病毒RNA转录水平更高；进一步通过感染体系检测胞内病毒DNA水平发现与Caco‑2细胞相比，只有MA104支持更高水平的病毒复制。最后，通过对病毒结合和内化、病毒复制水平、病毒颗粒形态和病毒粒子再感染等实验检测证实人博卡病毒Ⅰ型在MA104细胞中具备完整生命周期，包括病毒进入、复制、组装、释放。
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