公开(公告)号：CN114150031A

公开(公告)日：2022-03-08

申请号：CN202111392894.X

申请日：2021-11-23

Applicant: 安徽金禾实业股份有限公司

Inventor： 杨乐 ,  祁飞 ,  张敏 ,  戴永辉

IPC: C12P19/56 ,  C12P19/18 ,  C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/75 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷D的方法，其特征在于：（1）将糖基转移酶UGT76G1、AtSUSY基因接到PBR322质粒载体上，导到枯草芽孢杆菌中，再接入LB培养基，30～37℃、100‑250 rpm下培养20～24h；（2）按1%～10%的接种量接到种子罐，200～400 rpm、通气比0.1～1 V/V.min、30～37℃下培养20～24 h；（3）按1%～10%体积比接入发酵罐，200～1000 rpm、通气比0.1～2 V/V.min、30～37℃、pH为6～8下培养48～72h；（4）采用陶瓷膜超滤发酵液，菌体重悬、高压均质破碎，陶瓷膜超滤破碎液，得粗酶液；（5）将甜菊糖苷、尿苷二磷酸葡萄糖、Tris‑HCl缓冲液、粗酶液按质量比5‑10：1‑5：40‑60：5‑20混合，25‑40℃下反应12‑48 h。本发明优点：一次发酵得两种粗酶液，成本低，莱鲍迪苷D转化率达到88‑90 g/L。

公开(公告)号：CN114214378A

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN202111393395.2

申请日：2021-11-23

Applicant: 安徽金禾实业股份有限公司

Inventor： 杨乐 ,  张敏 ,  祁飞 ,  戴永辉

IPC: C12P19/56 ,  C12N1/20 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷M的方法，其特征在于：（1）将糖基转移酶UGT76G1和UGT11基因连到PBR322质粒载体上，导到枯草芽孢杆菌中，接入LB培养基，30～37℃、100‑250 rpm下培养20～24 h；（2）按1%～10%接种量接到种子罐，200～400 rpm、通气比0.1～1 V/V.min、30～37℃下培养20～24 h；（3）按1%～10%接入发酵罐，200～1000 rpm、通气比0.1～2 V/V.min、30～37℃、pH6～8下培养48～72h；（4）陶瓷膜超滤发酵液，菌体重悬、高压均质、陶瓷膜超滤菌体破碎液，得粗酶液；（5）将甜菊糖苷、尿苷二磷酸葡萄糖、磷酸缓冲液、粗酶液按质量比5‑10：1‑5：40‑60：5‑20混合，25‑40℃反应12‑48 h。本发明优点：一次发酵获得两种粗酶液，操作简单，成本低，转化率在88.4%以上。