公开(公告)号：CN112695055A

公开(公告)日：2021-04-23

申请号：CN202110103367.6

申请日：2021-01-26

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 蔡永萍 ,  黄满畅 ,  周晖 ,  张金云 ,  潘海发 ,  邱可立 ,  盛玉 ,  陈红莉 ,  谢庆梅

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明涉及园艺作物基因工程领域，提供了一种农杆菌介导桃遗传转化方法，包括如下步骤：遗传转化受体建立，农杆菌的培养与侵染液的配置，侵染与共培养，除菌与筛选培养，抗性愈伤组织GUS染色鉴定。本发明以愈伤组织为受体，以GUS基因为报告基因，通过农杆菌GV3101介导的方法进行桃的遗传转化，获得抗性愈伤组织，历经数次继代，经GUS染色确定为阳性愈伤组织。本发明方法可以显著提升农杆菌介导转化的成功率，同时此方法可以在桃基因工程、细胞工程、代谢工程以及桃遗传转化体系的建立中得到广泛应用。

公开(公告)号：CN118599973A

公开(公告)日：2024-09-06

申请号：CN202410874931.8

申请日：2024-07-02

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 姜鹏飞 ,  邱可立 ,  邵亮 ,  刘君 ,  徐睿 ,  李云飞 ,  郑撼 ,  江海洋

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6883 ,  C12Q1/6895 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种重叠PCR酶切联用的鉴定方法及试剂盒，所述方法包括以N4N5X或N4N5Y作为引入的酶切位点的后三碱基，选择对应的限制性内切酶，若无对应的限制性内切酶可选时，再以N5X或N5Y作为引入的酶切位点的后二碱基，选择对应的限制性内切酶；X/Y为SNP位点碱基或InDel差异的第一个碱基，N4/N5为X/Y位的前两个碱基，对应酶切位点的第4/5位碱基；扩增获得通用片段初次PCR产物；根据限制内切酶和通用引物设计PCR扩增引物并获得待测模板初次PCR产物；对两者重叠PCR扩增的终产物进行酶切基因分型。本发明利用DOPCR法鉴定SNP/InDel，与现有创造酶切位点方法相比，增加了重叠PCR的步骤，酶切片段差异显著，无需PAGE电泳，普通电泳便可完成检测，成本低且快速。