公开(公告)号：CN113604469B

公开(公告)日：2023-01-24

申请号：CN202110919746.2

申请日：2021-08-11

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  胡晓湘 ,  李耕林 ,  郑子文 ,  李果 ,  崔冲

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  A61K48/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明提供了一种靶向Tmc1突变体(c.1235T＞A；p.M412K)的sgRNA、表达载体、CRISPR‑CasRx系统、试剂盒及其应用，属于基因工程技术领域。本发明中所述的靶向Tmc1突变体的sgRNA的序列如SEQIDNO.3所示，含有该sgRNA的CasRx在不干扰野生型Tmc1+的情况下，能够使得Tmc1Bth转录物减少82％，将基于AAV‑PHP.eB载体的CasRx注入新生贝多芬小鼠内耳，发现Tmc1Bth在2周内减少了70％，整个转录组没有检测到脱靶。本发明提供的sgRNA靶向Tmc1突变体的特异性高，能够提高Tmc1Bth突变小鼠毛细胞存活率，使得纤毛束形态得以恢复，机械转导电流减少，对进行性听力损失有显著改善。

公开(公告)号：CN113604469A

公开(公告)日：2021-11-05

申请号：CN202110919746.2

申请日：2021-08-11

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  胡晓湘 ,  李耕林 ,  郑子文 ,  李果 ,  崔冲

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  A61K48/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明提供了一种靶向Tmc1突变体(c.1235T＞A；p.M412K)的sgRNA、表达载体、CRISPR‑CasRx系统、试剂盒及其应用，属于基因工程技术领域。本发明中所述的靶向Tmc1突变体的sgRNA的序列如SEQIDNO.3所示，含有该sgRNA的CasRx在不干扰野生型Tmc1+的情况下，能够使得Tmc1Bth转录物减少82％，将基于AAV‑PHP.eB载体的CasRx注入新生贝多芬小鼠内耳，发现Tmc1Bth在2周内减少了70％，整个转录组没有检测到脱靶。本发明提供的sgRNA靶向Tmc1突变体的特异性高，能够提高Tmc1Bth突变小鼠毛细胞存活率，使得纤毛束形态得以恢复，机械转导电流减少，对进行性听力损失有显著改善。