公开(公告)号：CN118773291A

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202410587156.8

申请日：2024-05-13

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王瑞 ,  刘殿威 ,  赵九龙 ,  庞亚南 ,  赖永康

IPC: C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种基于RCA‑CRISPR/Cas12a的一体化核酸检测方法，属于核酸检测技术领域。本发明使用单链DNA挂锁探针识别靶标，通过RCA扩增来进行序列放大，利用Cas12a和crRNA组装的复合物识别并结合RCA扩增的特异产物上的序列来激活Cas12a的反式切割活性，从而切割单链DNA报告分子产生荧光，将靶标的基因信息转换为了可视化的荧光变化，同时在连接反应中利用T4连接酶在DNA3’末端较高的特异性，可实现对单核苷酸突变的特异性检测。本发明将挂锁连接、RCA扩增与CRISPR/Cas12a切割三个体系结合到一管反应中，同时本发明中使用的RCA扩增反应形成的扩增产物为单链DNA，可以被Cas12a‑crRNA复合物识别无需PAM位点存在，实现了无PAM序列依赖的可视化、一体化核酸检测方法。

公开(公告)号：CN117625751A

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202311067056.4

申请日：2023-08-23

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王瑞 ,  郭凯明 ,  庞亚南

IPC: C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了基于CRISPR/Cas12a的一体化、无PAM依赖的核酸检测方法，属于核酸检测技术领域。本发明通过RPA来对靶标进行扩增，利用Cas12a和crRNA组装的复合物识别并结合RPA扩增的特异产物上的靶序列来激活Cas12a的反式切割活性，从而切割单链DNA报告分子产生荧光，将靶标的基因信息转换为了可视化的荧光变化。本发明将RPA体系与CRISPR/Cas12a体系结合，实现了无需开盖、转移等其他步骤的一体化检测；同时本发明利用RPA扩增中DNA与SSB蛋白结合后形成的单链被Cas12a‑crRNA复合物识别无需PAM的特点，实现了无PAM序列依赖的可视化、一体化核酸检测方法。