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公开(公告)号：CN105463135A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201610023649.4
申请日：2016-01-14
Applicant: 四川农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明公开了一种快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增的方法，包括LAMP最佳反应体系为25μL：1μL 8U Bst DNA聚合酶，2.5μL 10×ThermoPol buffer缓冲液，6μL 2.5mM each dNTPs，4μL 25mM MgCl2，外引物F3、B3(5μM)各1μL、内引物FIP、BIP(50μM)各1μL，1μL DNA模板，2.5μL 10M甜菜碱，加ddH2O补至25μL；在恒温水浴锅内进行LAMP反应，反应温度为63℃，反应时间为45min。本发明的特异性极高，灵敏度极高，快速高效，成本低廉、操作简便，可以有效应用于非洲猪瘟的快速诊断中，且适用于动物检疫机构和养殖场现场操作。
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公开(公告)号：CN105543410B
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201510997214.5
申请日：2015-12-25
Applicant: 四川农业大学
Inventor： 王印 , 彭善珍 , 杨泽晓 , 姚学萍 , 邬旭龙 , 张鹏飞 , 冷伊依 , 肖璐 , 任梅渗 , 曾相杰 , 罗忠永 , 胡凌 , 林星宇 , 张博 , 刘亚东 , 蒙正群 , 李桂黎 , 王波
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6837
Abstract: 本发明公开了一种基于TEM‑PCR和基因芯片检测猪病毒性疾病的方法，依据靶序列富集多重PCR，采用4对特异性的套式PCR引物和探针，并在各内引物的5’端分别加上能被一对通用引物识别的标签序列。本发明克服了传统PCR方法的诸多缺点，其兼容性、特异性、灵活性等都比传统PCR方法好得多；且本发明对Tem‑PCR的反应条件作了优化，建立了准确高效，方便快捷的检测方法；降低了反应的背景噪音，大大的节省了经费；首次结合了先进的Tem‑PCR多重扩增技术和基因芯片检测技术，建立了在一张芯片上可同时检测4种病原的体系，为以后的重要病原微生物的分子生物学检测奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105543410A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201510997214.5
申请日：2015-12-25
Applicant: 四川农业大学
Inventor： 王印 , 彭善珍 , 杨泽晓 , 姚学萍 , 邬旭龙 , 张鹏飞 , 冷伊依 , 肖璐 , 任梅渗 , 曾相杰 , 罗忠永 , 胡凌 , 林星宇 , 张博 , 刘亚东 , 蒙正群 , 李桂黎 , 王波
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6837 , C12Q2537/143 , C12Q2563/107 , C12Q2565/501
Abstract: 本发明公开了一种基于TEM-PCR和基因芯片检测猪病毒性疾病的方法，依据靶序列富集多重PCR，采用4对特异性的套式PCR引物和探针，并在各内引物的5’端分别加上能被一对通用引物识别的标签序列。本发明克服了传统PCR方法的诸多缺点，其兼容性、特异性、灵活性等都比传统PCR方法好得多；且本发明对Tem-PCR的反应条件作了优化，建立了准确高效，方便快捷的检测方法；降低了反应的背景噪音，大大的节省了经费；首次结合了先进的Tem-PCR多重扩增技术和基因芯片检测技术，建立了在一张芯片上可同时检测4种病原的体系，为以后的重要病原微生物的分子生物学检测奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105969910A
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201510996088.1
申请日：2015-12-25
Applicant: 四川农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2600/16 , C12Q2537/143 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明公开了一种检测猪繁殖障碍病毒的多重GeXP‑PCR方法，采用含7种猪繁殖障碍病毒靶基因的PRV,ASFV,PPV，PRRSV，CSFV,PCV2,JEV嵌合引物和通用引物以适当配比参加PCR反应，PRV,ASFV,PPV上下游特异性嵌合引物的浓度均为1.5μM，PRRSV,CSFV,PCV2,JEV上下游特异性嵌合引物的浓度均为1μM，特异性嵌合引物的最佳退火温度为60℃，通用引物最佳退火温度为50℃。本发明改善了多重PCR过程中不同靶基因的扩增偏好性，从而提高目的基因的检测效率，提高了检测的特异性，大大提高了分辨率和灵敏度，从而实现猪繁殖障碍病毒的快速检测。
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