公开(公告)号：CN106519023A

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201610410714.9

申请日：2016-06-03

Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)

Inventor： 阚光锋 ,  王晓飞 ,  史翠娟 ,  解秋菊 ,  任丹丹 ,  文华 ,  魏轲

IPC: C07K14/825 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02

CPC classification number: C07K14/825 ,  C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明提供了一种嗜冷酵母金属硫蛋白的基因克隆、表达方法及应用。通过提取该金属硫蛋白基因，设计引物F1、R1，经PCR扩增后与表达载体进行连接，构建重组表达载体；将重组表达载体转化入表达菌株，构建重组表达转化体；建立了该重组蛋白的表达与纯化方法。所述金属硫蛋白基因，其核苷酸序列及编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。本发明克隆获得的新型金属硫蛋白，含有16个半胱氨酸，丰富的巯基能够螯合多种金属重金属离子，在医药、食品保健及化妆品添加剂、基因工程试剂、化工、环保、动物、农业等领域前景广阔。

公开(公告)号：CN106566819B

公开(公告)日：2020-04-14

申请号：CN201610410715.3

申请日：2016-06-03

Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)

Inventor： 阚光锋 ,  王晓飞 ,  史翠娟 ,  解秋菊 ,  文华 ,  邬志惠

IPC: C12N9/28 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  A62D3/02 ,  C11D3/386

Abstract: 本发明提供了一种低温嗜盐α—淀粉酶的基因克隆、表达及分离纯化方法。通过提取该金属硫蛋白基因，设计引物TAC‑F7、TAC‑R5，经PCR扩增后与表达载体进行连接，构建重组质粒；将重组质粒转化入表达菌株，构建重组基因工程菌；建立了该重组蛋白的表达与纯化方法。其低温嗜盐α—淀粉酶核苷酸序列及编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，其信号肽的基因和氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。该淀粉酶具有如下性质：最适温度20℃，最适pH 8.0，最适盐浓度为1M NaCl；作为一种新型的低温嗜盐酶制剂，可有效的用于食品、发酵、医药、皮革、酿造、饲料、纺织和洗涤剂等工业中。

公开(公告)号：CN106566819A

公开(公告)日：2017-04-19

申请号：CN201610410715.3

申请日：2016-06-03

Applicant: 哈尔滨工业大学(威海)

Inventor： 阚光锋 ,  王晓飞 ,  史翠娟 ,  解秋菊 ,  文华 ,  邬志惠

IPC: C12N9/28 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  A62D3/02 ,  C11D3/386

Abstract: 本发明提供了一种低温嗜盐α‑淀粉酶的基因克隆、表达及应用。通过提取该金属硫蛋白基因，设计引物TAC‑F7、TAC‑R5，经PCR扩增后与表达载体进行连接，构建重组质粒；将重组质粒转化入表达菌株，构建重组基因工程菌；建立了该重组蛋白的表达与纯化方法。该低温嗜盐α‑淀粉酶核苷酸序列及编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，其信号肽的基因和氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。该淀粉酶具有如下性质：最适温度20℃，最适pH 8.0，最适盐浓度为1M NaCl；作为一种新型的低温嗜盐酶制剂，可有效的用于食品、发酵、医药、皮革、酿造、饲料、纺织和洗涤剂等工业中。