公开(公告)号：CN110305905B

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN201910595216.X

申请日：2019-07-03

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 王菁华 ,  穆莉莉 ,  李呼伦 ,  王广友 ,  胡琼琼 ,  张刘磊 ,  赵崴 ,  孔庆飞 ,  孙博 ,  刘玉梅 ,  刘希君 ,  张瑶 ,  张彤帅 ,  张晓雨

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N15/62 ,  C12N7/01 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及小鼠Tmem240重组真核表达质粒、慢病毒及构建方法。本发明重组真核表达质粒是将SEQ ID NO.1序列插入pEGFP‑N1载体的XhoI位点和EcoRI位点之间获得。慢病毒构建是以pEGFP‑T240‑N1质粒为模板，利用引物引物对1进行PCR扩增，合成含有APEX2的目的片段；对载体pLVX‑EGFP‑N1进行双酶切；对Tmem240片段进行双酶切；对含有APEX2目的片段进行双酶切；对酶切产物Tmem240片段，含有APEX2目的片段及载体pLVX‑EGFP‑N1回收、T4连接酶连接、感受态细胞转化，并进行菌落PCR验证；质粒提取，并测序，得到构建成功的pLVX‑T240‑APEX2‑EGFP，将其与psPAX2、pMD2.G质粒共同转染至293Ta细胞，并收集获得。

公开(公告)号：CN110305905A

公开(公告)日：2019-10-08

申请号：CN201910595216.X

申请日：2019-07-03

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 王菁华 ,  穆莉莉 ,  李呼伦 ,  王广友 ,  胡琼琼 ,  张刘磊 ,  赵崴 ,  孔庆飞 ,  孙博 ,  刘玉梅 ,  刘希君 ,  张瑶 ,  张彤帅 ,  张晓雨

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N15/62 ,  C12N7/01 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及小鼠Tmem240重组真核表达质粒、慢病毒及构建方法。本发明重组真核表达质粒是将SEQ ID NO.1序列插入pEGFP-N1载体的XhoI位点和EcoRI位点之间获得。慢病毒构建是以pEGFP-T240-N1质粒为模板，利用引物引物对1进行PCR扩增，合成含有APEX2的目的片段；对载体pLVX-EGFP-N1进行双酶切；对Tmem240片段进行双酶切；对含有APEX2目的片段进行双酶切；对酶切产物Tmem240片段，含有APEX2目的片段及载体pLVX-EGFP-N1回收、T4连接酶连接、感受态细胞转化，并进行菌落PCR验证；质粒提取，并测序，得到构建成功的pLVX-T240-APEX2-EGFP，将其与psPAX2、pMD2.G质粒共同转染至293Ta细胞，并收集获得。