公开(公告)号：CN114149976A

公开(公告)日：2022-03-08

申请号：CN202111427318.4

申请日：2021-11-26

Applicant: 同济大学

Inventor： 高倩倩 ,  张婷婷 ,  艾宜岑 ,  杨博 ,  徐策 ,  房璐 ,  徐君琴 ,  曾家鑫 ,  吴谦

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12N15/31 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明属于生化检测领域，涉及一种真核细胞S‑腺苷甲硫氨酸浓度感知荧光报告系统，填补了活细胞内SAM浓度灵敏检测的技术空白，同时实现了调控SAM代谢的功能基因筛选。首先公开了一种基于大肠杆菌蛋氨酸代谢途径中MetJ阻遏蛋白和met‑box序列的结合偏好性，利用AAVS1定点插入构建的真核细胞的SAM感知系统。主要包括：S1：从MetJ蛋白结合的候选序列中确定可实时反映SAM浓度的met‑box序列,并筛选优选序列；S2：利用AAVS1定点插入荧光报告序列，获得等位基因双荧光报告系统；S3：将MetJ蛋白和Cas9蛋白构入报告系统，获得可感知SAM浓度的双荧光报告系统。本发明提供了一种真核细胞SAM浓度实时感知荧光报告系统，利用此系统可检测活细胞内SAM浓度并筛选调控SAM代谢的相关基因。