公开(公告)号：CN102433350A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201110381716.7

申请日：2011-11-25

Applicant: 厦门大学

Inventor： 韩家淮 ,  徐虹 ,  黄晶 ,  吴娟

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/10 ,  C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N9/22 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/44 ,  C12P19/34

Abstract: 核酸内切酶DUF820-2的原核表达与制备方法及应用，涉及核酸内切酶。从蓝藻Microcystis aeruginosa PCC7806染色体DNA上PCR扩增出DUF820-2基因，再克隆到表达载体pGEX-6p-1中，将重组质粒pGEX-DUF820-2转化大肠杆菌，实现DUF820-2在大肠杆菌中的诱导表达。将诱导表达菌用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化得DUF820-2蛋白。DNA酶切实验表明，表达纯化的DUF820-2蛋白具有核酸内切酶的活性，在反应缓冲液中能酶切环状质粒DNA和染色体DNA。该酶在30～64℃温度范围内具有核酸内切酶活性。具有比现有市售的核酸内切酶更广泛的应用范围和前景。

公开(公告)号：CN102492705A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110382899.4

申请日：2011-11-25

Applicant: 厦门大学

Inventor： 韩家淮 ,  徐虹 ,  黄晶 ,  吴娟

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N9/22 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/44 ,  C12R1/89 ,  C12R1/19

Abstract: 核酸内切酶DUF820-1的原核表达与制备方法及应用，涉及核酸内切酶。从蓝藻Microcystis aeruginosa PCC7806染色体DNA上PCR扩增出DUF820-1基因，将其克隆到表达载体pET-His中，将构建成功的重组质粒pET-DUF820-1转化大肠杆菌，实现DUF820-1在大肠杆菌中的大量诱导表达。将诱导表达菌超声破碎后用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化可得DUF820-1蛋白。DNA酶切实验表明，表达纯化的DUF820-1蛋白具有核酸内切酶的活性，在合适的反应缓冲液中能酶切环状质粒DNA和染色体DNA。该酶在30～64℃温度内具有核酸内切酶活性，其最适反应温度为61℃。