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公开(公告)号：CN115491344A
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN202211128102.2
申请日：2022-09-16
Applicant: 南昌大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明提供了一种小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型构建的方法，主要包括如下步骤：小鼠肺的分离、肺成纤维细胞的分离、肺成纤维细胞的纯化、肺成纤维细胞体外激活模型的构建，得到肺成纤维细胞体外激活模型。本发明通过创新性联合使用差时贴壁法、差速贴壁法和细胞营养筛选法，可以避免原代细胞培养过程中混杂大量非成纤维细胞所带来的细胞筛选困难，该方法操作简便、效率高，无需昂贵仪器设备就可完成小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型的构建，对于今后实验研究具有重要参考价值。
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公开(公告)号：CN109082401B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN201810857098.0
申请日：2018-07-31
Applicant: 南昌大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公布了一种利用人羊膜上皮干细胞诱导分化为具有生物功能的肝脏细胞的方法，包括以下步骤：1)羊膜上皮干细胞的分离、培养、扩增、鉴定及GFP(Green Fluorescent Protein)标志；2)体外诱导分化：实验用带有GFP标志的第3～7代羊膜上皮细胞干细胞，选择用含诱导培养基Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的体系1或者采用含诱导培养基Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的体系2进行诱导分化。经体系1(诱导时间为14‑15天)或体系2(诱导时间为22‑23天)诱导分化得到能够表达肝脏细胞特异性标志物及具有正常肝脏细胞功能的肝脏细胞样细胞；3)体内移植：将诱导产生的肝脏样细胞移植到急性肝损伤模型小鼠体内，可明显缓解急性肝损伤、恢复小鼠肝脏功能及提高小鼠存活率。
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公开(公告)号：CN112226403A
公开(公告)日：2021-01-15
申请号：CN202011122707.1
申请日：2020-10-20
Applicant: 南昌大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及体外化疗损伤模型构建的方法，主要包含以下步骤：1)注射PMSG促进3‑4周龄的幼年小鼠排卵；2)小鼠卵巢的分离及卵泡破碎：将促排卵48小时的小鼠腹部剖开，取出双侧卵巢，剥离卵巢周围脂肪组织与结缔组织。在显微镜下用1mL注射器针头刺破卵泡释放卵巢颗粒细胞。过200目塞网后放置于15mL离心管中待用；3)0.25％胰酶消化卵巢：将卵泡破碎后的卵巢组织放入0.25％胰酶，置于37℃的水浴锅中消化30分钟，过200目筛网后装入15mL离心管内，离心后便可获得大量纯度较高的卵巢颗粒细胞；4)卵巢颗粒细胞体外化疗损伤模型的构建：用浓度为5mg/mL环磷酰胺(CTX)处理卵巢颗粒细胞24小时，可得到卵巢颗粒细胞化疗损伤模型。
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公开(公告)号：CN111849861A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010551733.X
申请日：2020-06-17
Applicant: 南昌大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明涉及细胞分离领域，公开了一种小鼠肝星状细胞分离、提取与培养的方法。该方法包括以下步骤：准备12周以上的成年小鼠，灌流得到体内消化后的肝脏，经加双抗的DMEM多次清洗后，进行肝脏的捣碎，捣碎后的肝脏经胶原酶和链霉蛋白酶混合液，37℃水浴锅中消化10分钟后，过200目滤网，经离心，去上清，密度梯度离心后，用肝星状细胞培养基置于5％CO2、95％湿度、37℃培养箱中培养，24小时后换液去除未贴壁细胞，随后每2天换液。本发明的方法简单高效，能够较高得率的获得小鼠肝星状细胞，为研究肝纤维化获得了宝贵的实验材料，有利于充分了解肝星状细胞在肝脏纤维化过程中起的作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109082401A
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201810857098.0
申请日：2018-07-31
Applicant: 南昌大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公布了一种利用人羊膜上皮干细胞诱导分化为具有生物功能的肝脏细胞的方法，包括以下步骤：1)羊膜上皮干细胞的分离、培养、扩增、鉴定及GFP(Green Fluorescent Protein)标志；2)体外诱导分化：实验用带有GFP标志的第3～7代羊膜上皮细胞干细胞，选择用含诱导培养基Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的体系1或者采用含诱导培养基Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的体系2进行诱导分化。经体系1(诱导时间为14-15天)或体系2(诱导时间为22-23天)诱导分化得到能够表达肝脏细胞特异性标志物及具有正常肝脏细胞功能的肝脏细胞样细胞；3)体内移植：将诱导产生的肝脏样细胞移植到急性肝损伤模型小鼠体内，可明显缓解急性肝损伤、恢复小鼠肝脏功能及提高小鼠存活率。
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公开(公告)号：CN111518743A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010311466.9
申请日：2020-04-20
Applicant: 南昌大学
Abstract: 本发明涉及细胞培养领域，具体公开了一种人真皮成纤维细胞体外热损伤模型构建的方法及其应用，主要包含以下步骤：1)人真皮成纤维细胞的分离及培养；2)人真皮成纤维细胞纯化：利用真皮成纤维细胞和表皮角质细胞对胰酶敏感性的差异，用0.05％胰酶/EDTA消化原代培养细胞1‑2分钟，消化下来的为真皮成纤维细胞。用此方法将细胞传代至第三代，可得到纯度为100％的真皮成纤维细胞；3)真皮成纤维细胞体外热损伤模型的构建：将接种有真皮成纤维细胞的培养板放置于37℃水浴锅中，热处理50分钟，可得到真皮成纤维细胞热损伤模型。
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公开(公告)号：CN110423720A
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201910665356.X
申请日：2019-07-23
Applicant: 南昌大学
Abstract: 本发明公布了一种利用人羊膜上皮干细胞诱导分化为具有生物功能的胰岛β细胞的方法，包括以下步骤：1)羊膜上皮干细胞的分离、培养、扩增、鉴定；2)体外诱导分化：实验选择第2～3代羊膜上皮干细胞，用含有尼克酰胺的培养基进行诱导分化。经体外14天分化得到能够表达胰岛β细胞特异性标志物及具有正常胰岛β细胞功能的胰岛素分泌细胞；3)体内移植：将诱导产生的胰岛素分泌细胞移植到1型糖尿病小鼠体内，可明显缓解小鼠高血糖状态。
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