公开(公告)号：CN118048440A

公开(公告)日：2024-05-17

申请号：CN202410104483.3

申请日：2024-01-25

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  田冰坤 ,  陈红 ,  王蓉蓉 ,  潘豪 ,  潘振康 ,  郭新月 ,  汤庆春 ,  李谋

IPC: C12Q1/686 ,  C12Q1/6848 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于N7HW‑PCR的基因组步移引物及方法，通过将一级PCR的随机步移引物pWP的5’端的7个碱基简并为N7，其余部分保持不变，得到引物ds/tWP；将ds/tWP用于二级和三级PCR中，使得二级、三级步移引物与一级步移引物之间不完全匹配，进而使一级PCR所得非目标产物在二级和三级PCR中不能被有效扩增而被消除。本发明方法相较于传统PCR方法，具有引物用量少、操作简单、效率高等优点。

公开(公告)号：CN117844910A

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202311854834.4

申请日：2023-12-29

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  陈红 ,  王蓉蓉 ,  田冰坤 ,  李谋 ,  汤庆春 ,  潘振康 ,  潘豪 ,  郭新月

IPC: C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于尿嘧啶引物PCR的基因组步移方法，通过在随机引物（arbitrary walking primer，AWP）3’端的倒数第二个位置引入了尿嘧啶碱基，并在二级UP‑PCR之前，使AWP序列在UNG的作用下被破坏，使得在二级UP‑PCR的热循环中，避免不需要的扩增子被扩增，仅两轮UP‑PCR就足以完成基因组步移任务，并获得足够的扩增特异性，相较传统的热不对称交错PCR、腕表PCR、桥接PCR等基因组步移方法更为简单易行，且具有同等的成功率。

公开(公告)号：CN118440933A

公开(公告)日：2024-08-06

申请号：CN202410409451.4

申请日：2024-04-07

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  王蓉蓉 ,  陈红 ,  田冰坤 ,  郭新月 ,  潘豪 ,  潘振康 ,  李谋 ,  汤庆春

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种基于尿嘧啶碱基PCR的基因组步移方法，包括：1）在初级PCR中使用dUTP代替dTTP进行扩增；2）对初级PCR产物过柱纯化去除多余的底物、引物和酶；3）然后用初级特异性引物Specific primer，SP和四种正常碱基（A、T、C、G），对纯化产物进行单引物单循环扩增，合成完全由正常碱基组成的单链DNA；4）随后对单引物单循环扩增产物进行UNG处理，破坏含U的DNA，而在单引物单循环扩增中合成的分子则不受影响；5）最后目标单链DNA分子在后续的高严格循环中被特异性引物SP2和AP进行指数扩增得到目的产物。本发明方法能够有效扩增目标DNA分子，抑制非目标产物的扩增，相较传统PCR方法，具有更高的成功率和步移效率。