公开(公告)号：CN109750055B

公开(公告)日：2022-12-23

申请号：CN201910188876.6

申请日：2019-03-13

申请人： 南开大学

发明人： 于仲波 ,  李旭 ,  马小凤 ,  屈利花 ,  黄威

IPC分类号： C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C07K19/00

摘要： 本发明提供一种基于α螺旋把手提高蛋白核酸生物耦合效率的方法；首先设计携带非天然氨基酸的把手H‑tag，其次构建含有H‑tag和待测蛋白的融合重组表达质粒，再次表达纯化在H‑tag中含有非天然氨基酸的融合重组蛋白，最后对融合蛋白H‑tag中非天然氨基酸和核酸底物上的耦合基团进行高效点击化学连接。本方法使用α螺旋把手为非天然氨基酸提供可控的蛋白表面反应条件，避免待测蛋白表面复杂的结构、电荷和极性纳米环境，从而实现对蛋白与核酸进行高效点击化学连接等目标。

公开(公告)号：CN109576298A

公开(公告)日：2019-04-05

申请号：CN201910023444.X

申请日：2019-01-10

申请人： 南开大学

发明人： 马小凤

IPC分类号： C12N15/70

摘要： 本发明涉及一种利用细胞透性化处理提高非天然氨基酸引入蛋白效率的方法。本方法既提高了非天然氨基酸引入蛋白的效率，同时提高了含非天然氨基酸的全长融合蛋白的产量，其具体实验过程如下：将表达目的蛋白的质粒首先在大肠杆菌细胞中扩增，随后提取质粒并进行定点突变，得到突变的重组质粒，接下来将突变的重组质粒与辅助质粒一起转化到大肠杆菌感受态细胞中，最后通过向含非天然氨基酸的培养基中加入不同浓度和种类的透性化试剂来提高非天然氨基酸引入蛋白的效率。

公开(公告)号：CN109750055A

公开(公告)日：2019-05-14

申请号：CN201910188876.6

申请日：2019-03-13

申请人： 南开大学

发明人： 于仲波 ,  李旭 ,  马小凤 ,  屈利花 ,  黄威

IPC分类号： C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C07K19/00

摘要： 本发明提供一种基于α螺旋把手提高蛋白核酸生物耦合效率的方法；首先设计携带非天然氨基酸的把手H-tag，其次构建含有H-tag和待测蛋白的融合重组表达质粒，再次表达纯化在H-tag中含有非天然氨基酸的融合重组蛋白，最后对融合蛋白H-tag中非天然氨基酸和核酸底物上的耦合基团进行高效点击化学连接。本方法使用α螺旋把手为非天然氨基酸提供可控的蛋白表面反应条件，避免待测蛋白表面复杂的结构、电荷和极性纳米环境，从而实现对蛋白与核酸进行高效点击化学连接等目标。