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公开(公告)号：CN114457113B
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202210216902.3
申请日：2022-03-07
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明一种抑制单倍体胚胎干细胞二倍化的方法公开了步骤一、构建Has2基因的表达载体；步骤二、将Has2基因的表达载体转染到单倍体胚胎干细胞中，得到待流式分选的细胞；步骤三、自待流式分选的细胞中分选得到HAS2基因的表达载体转染成功的单倍体胚胎干细胞进行培养。本发明通过在单倍体胚胎干细胞中转染外源性的Has2基因，实现Has2基因的高表达，以达到显著提高单倍体胚胎干细胞的单倍体维持能力的目的。从而在血清培养条件下长时间维持单倍体比例且不需要分选，以便于更好推进单倍体胚胎干细胞的应用。
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公开(公告)号：CN108048400A
公开(公告)日：2018-05-18
申请号：CN201711435471.5
申请日：2017-12-26
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/0797
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，在原有普通猴子干细胞培养基的基础上进行优化培养，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y‑27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培养基；将初步形成神经外胚层的EB球种在基底胶铺底的培养皿中，加入神经诱导培养基进行分化；挑取神经花环，种在30μg/ml多鸟氨酸和3μg/ml层粘连蛋白铺底的培养皿中；培养14天后，进行流式细胞术，分选单倍体细胞。本发明第一次实现了在体外获得猴子单倍体神经干细胞，并具有向神经下游方向分化的能力。
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公开(公告)号：CN111876375B
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN202010798579.6
申请日：2020-08-10
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种小鼠单倍体干细胞的获得方法，包括如下步骤：步骤一、将p53敲除的小鼠单倍体胚胎干细胞通过显微注射的方法，注射到野生型小鼠囊胚中得到重构胚胎；步骤二、将重构胚胎移植回0.5天的假孕母鼠的输卵管或2.5天假孕母鼠的子宫中，在胚胎发育到E6.5天时进行解剖，分离上胚层区域；步骤三、将上胚层区域种在培养基中培养，最终形成小鼠单倍体上胚层干细胞。本发明通过p53‑KO的方法，有效抑制了单倍体干细胞在体内分化过程中的自发二倍化，并借助嵌合体技术在体外成功建立了来源于着床后上胚层组织的小鼠单倍体上胚层干细胞系。
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公开(公告)号：CN108048400B
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN201711435471.5
申请日：2017-12-26
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/0797
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，在原有普通猴子干细胞培养基的基础上进行优化培养，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y‑27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培养基；将初步形成神经外胚层的EB球种在基底胶铺底的培养皿中，加入神经诱导培养基进行分化；挑取神经花环，种在30μg/ml多鸟氨酸和3μg/ml层粘连蛋白铺底的培养皿中；培养14天后，进行流式细胞术，分选单倍体细胞。本发明第一次实现了在体外获得猴子单倍体神经干细胞，并具有向神经下游方向分化的能力。
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公开(公告)号：CN111876375A
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN202010798579.6
申请日：2020-08-10
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种小鼠单倍体干细胞的获得方法，包括如下步骤：步骤一、将p53敲除的小鼠单倍体胚胎干细胞通过显微注射的方法，注射到野生型小鼠囊胚中得到重构胚胎；步骤二、将重构胚胎移植回0.5天的假孕母鼠的输卵管或2.5天假孕母鼠的子宫中，在胚胎发育到E6.5天时进行解剖，分离上胚层区域；步骤三、将上胚层区域种在培养基中培养，最终形成小鼠单倍体上胚层干细胞。本发明通过p53-KO的方法，有效抑制了单倍体干细胞在体内分化过程中的自发二倍化，并借助嵌合体技术在体外成功建立了来源于着床后上胚层组织的小鼠单倍体上胚层干细胞系。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107828826A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711318006.3
申请日：2017-12-12
Applicant: 南开大学
CPC classification number: C12N15/907 , C12N5/0623 , C12N9/22
Abstract: 本发明涉及细胞生物学技术领域，具体来说是一种体外高效获得神经干细胞的方法，A、通过CRISPR/Cas9系统构建拥有Pax6-GFP报告系统的胚胎干细胞细胞系；B、Pax6-GFP ES报告系统在体外和体内指示神经分化；C、Pax6-GFP报告系统富集纯化神经干细胞；本发明使用CRISPR/Cas9基因编辑工具构建了具有Pax6-GFP荧光报告系统的细胞系，并通过这个细胞系实现了体外神经干细胞的快速、高效获得。
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公开(公告)号：CN119320744A
公开(公告)日：2025-01-17
申请号：CN202411662755.8
申请日：2024-11-20
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/074 , C12N5/073 , C12N5/0735 , C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及一种人类单倍体滋养层干细胞的制备方法，将单倍体胚胎干细胞(hAG‑ESCs)接种于人类滋养层干细胞(TSC)的培养基后进行驯化，当TSC样克隆占据诱导过程中所有细胞比例的50％以上后，流式分选ITGA6阳性的细胞再次接种到TSC培养基中培养，培养后获得单倍体滋养层干细胞(haiTSCs)；制备得到的haiTSCs为单倍体，并具有TSC属性。该制备方法快速高效，haiTSCs能够用于模拟体内疾病模型，并具有单倍体的遗传学筛选优势。
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公开(公告)号：CN118389597A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410543731.4
申请日：2024-05-06
Applicant: 南开大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/0735 , C12N5/10 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了一种小鼠全能性干细胞的获得方法，包括：构建Pdzk1基因敲除的载体质粒；Pdzk1基因敲除的小鼠胚胎干细胞的获得；通过嵌合体实验证明该干细胞具有全能性；通过在体外自组装囊胚后可建立三种不同谱系的干细胞系证明此细胞具有全能性。本发明通过在胚胎干细胞中敲除Pdzk1基因，并通过嵌合体实验和体外类囊胚建系实验证明其具有全能性，便于更好地推进哺乳动物早期胚胎发育的研究。
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公开(公告)号：CN118389597B
公开(公告)日：2025-01-28
申请号：CN202410543731.4
申请日：2024-05-06
Applicant: 南开大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/0735 , C12N5/10 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了一种小鼠全能性干细胞的获得方法，包括：构建Pdzk1基因敲除的载体质粒；Pdzk1基因敲除的小鼠胚胎干细胞的获得；通过嵌合体实验证明该干细胞具有全能性；通过在体外自组装囊胚后可建立三种不同谱系的干细胞系证明此细胞具有全能性。本发明通过在胚胎干细胞中敲除Pdzk1基因，并通过嵌合体实验和体外类囊胚建系实验证明其具有全能性，便于更好地推进哺乳动物早期胚胎发育的研究。
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公开(公告)号：CN117210498A
公开(公告)日：2023-12-12
申请号：CN202311175477.9
申请日：2023-09-13
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明公开了一种小鼠人造自组装囊胚的快速构建方法，包括如下步骤：步骤一、构建Dyrk1a基因敲除的载体；步骤二、将Dyrk1a基因敲除的载体转染至胚胎干细胞中，并等待流式分选；步骤三、分选获得顺利转染Dyrk1a基因敲除载体的胚胎干细胞，进一步培养并对其进行亚克隆挑取和基因型鉴定；步骤四、将Dyrk1a基因敲除的胚胎干细胞置于自组装囊胚培养体系中培养。本发明通过在胚胎干细胞中敲除Dyrk1a基因，使胚胎干细胞获得类全能性，以获得在体外可自组装形成囊胚样结构的能力，便于更好推进哺乳动物早期胚胎发育的研究。
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