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公开(公告)号：CN102250866B
公开(公告)日：2012-08-22
申请号：CN201110172973.X
申请日：2011-06-24
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N11/08
Abstract: 本发明公开了一种拟水相载体固定化木聚糖酶，由如下步骤制备得到：将单甲氧基聚乙二醇与活化剂反应，得到烷氧基醇活化酯；将木聚糖酶与烷氧基醇活化酯反应制备拟水相载体固定化木聚糖酶，再经凝胶过滤色谱纯化、冷冻干燥即得。本发明还公开了利用上述拟水相载体固定化木聚糖酶制备低聚木糖的方法。本发明的优点在于：水溶性载体固定化酶与不溶性底物之间的有效接触，呈现均相催化反应，提高转化效率；烷氧基醇具有稳定酶的作用，保证固定化酶维持高酶活力；利用烷氧基醇的成两水相特征，自萃取回收固定化酶，实现拟水相载体固定化酶、底物、产物的自主分离；转化过程的可控性，使生成的低聚木糖聚合度分布更为合理，提高产品品质。
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公开(公告)号：CN101624574A
公开(公告)日：2010-01-13
申请号：CN200910184453.3
申请日：2009-08-06
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种表达高稳定性木聚糖酶的酵母工程菌，其保藏号为CCTCC NO：M 209148，该酵母工程菌是在分泌型巴氏毕赤酵母重组菌株中转化有重组突变质粒pPIC9KXYN17，所述的重组突变质粒pPIC9KXYN17以三磷酸甘油醛脱氢酶基因为启动子，并含有木聚糖酶基因和ZeocinTM抗性基因。本发明还公开了上述酵母工程菌的构建方法和应用。该重组工程菌具体表现为比酶活由203IU/mg增加到856IU/mg；最适反应温度由50℃提高到60℃；70℃半衰期由1分钟提高到14分钟，在50℃、60min下的pH稳定范围由5.0～7.0扩展到4.0～10.0。
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公开(公告)号：CN1847254A
公开(公告)日：2006-10-18
申请号：CN200510094118.6
申请日：2005-08-30
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种将聚合度为2～8的低聚木糖中的木二糖、木三糖、木四糖、木五糖、木六糖、木七糖和木八糖制备分离的方法，其特征在于先用截留分子量为5000的超滤膜将低聚木糖和未降解的高聚物分离，再将超滤得到的低聚木糖混合物用聚丙烯酰胺凝胶为层析介质在层析分离柱上进行多次制备分离。采用本方法，可以将低聚木糖各组分进行有效的制备分离，纯度达到90％以上，可以为低聚木糖的生物活性研究和产品质量检测提供系列的单组分低聚木糖标准样品。
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公开(公告)号：CN101294175B
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN200810122697.4
申请日：2008-06-20
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种双水相水解体系制备低聚木糖的方法，包括如下步骤：1、在水解槽中，配置聚乙二醇和硫酸铵体系，或聚乙二醇和葡聚糖体系的双水相系统；2、加入粗木聚糖溶液和木聚糖酶，进行酶水解反应；3、将反应液转入分配槽，静置成相后，下相经超滤膜分离，再经纳滤膜分离得低聚木糖；回收下相经超滤后的截留物，与上相合并，转入水解槽；4、对于原始聚乙二醇和硫酸铵体系的双水相系统，在水解槽中，再加入硫酸铵，形成双水相体系，返回步骤2；对于原始聚乙二醇和葡聚糖体系的双水相系统，直接返回步骤2。本发明技术利用双水相体系，回收利用木聚糖酶，提高了木聚糖酶的利用率，易于规模放大，操作简便，生产成本低。
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公开(公告)号：CN101624574B
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN200910184453.3
申请日：2009-08-06
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种表达高稳定性木聚糖酶的酵母工程菌，其保藏号为CCTCC NO：M209148，该酵母工程菌是在分泌型巴氏毕赤酵母重组菌株中转化有重组突变质粒pPIC9KXYN17，所述的重组突变质粒pPIC9KXYN17以三磷酸甘油醛脱氢酶基因为启动子，并含有木聚糖酶基因和ZeocinTM抗性基因。本发明还公开了上述酵母工程菌的构建方法和应用。该重组工程菌具体表现为比酶活由203IU/mg增加到856IU/mg；最适反应温度由50℃提高到60℃；70℃半衰期由1分钟提高到14分钟，在50℃60min下的pH稳定范围由5.0～7.0扩展到4.0～10.0。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101338333A
公开(公告)日：2009-01-07
申请号：CN200810021531.3
申请日：2008-08-12
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明属于纤维素酶解领域，公开了一种将农林废弃物转化为可发酵糖的方法。该方法包括将粉碎后的农林废弃物采用蒸汽爆破预处理、水洗，然后进行酶解糖化，酶解糖化过程中使用了活性剂。本发明与以往的方法相比由于添加活性剂阻止了木质素对纤维素酶的非生产性吸附，提高纤维素酶有效浓度，解决了传统水解工艺中酶用量多的问题。本发明具有耗酶量低，工艺简单，糖转化率高等优点。
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公开(公告)号：CN101294175A
公开(公告)日：2008-10-29
申请号：CN200810122697.4
申请日：2008-06-20
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种双水相水解体系制备低聚木糖的方法，包括如下步骤：1.在水解槽中，配置聚乙二醇和硫酸铵体系，或聚乙二醇和葡聚糖体系的双水相系统；2.加入粗木聚糖溶液和木聚糖酶，进行酶水解反应；3.将反应液转入分配槽，静置成相后，下相经超滤膜分离，再经纳滤膜分离得低聚木糖；回收下相经超滤后的截留物，与上相合并，转入水解槽；4.对于原始聚乙二醇和硫酸铵体系的双水相系统，在水解槽中，再加入硫酸铵，形成双水相体系，返回步骤2；对于原始聚乙二醇和葡聚糖体系的双水相系统，直接返回步骤2。本发明技术利用双水相体系，回收利用木聚糖酶，提高了木聚糖酶的利用率，易于规模放大，操作简便，生产成本低。
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公开(公告)号：CN102250866A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110172973.X
申请日：2011-06-24
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种拟水相载体固定化木聚糖酶，由如下步骤制备得到：将单甲氧基聚乙二醇与活化剂反应，得到烷氧基醇活化酯；将木聚糖酶与烷氧基醇活化酯反应制备拟水相载体固定化木聚糖酶，再经凝胶过滤色谱纯化、冷冻干燥即得。本发明还公开了利用上述拟水相载体固定化木聚糖酶制备低聚木糖的方法。本发明的优点在于：水溶性载体固定化酶与不溶性底物之间的有效接触，呈现均相催化反应，提高转化效率；烷氧基醇具有稳定酶的作用，保证固定化酶维持高酶活力；利用烷氧基醇的成两水相特征，自萃取回收固定化酶，实现拟水相载体固定化酶、底物、产物的自主分离；转化过程的可控性，使生成的低聚木糖聚合度分布更为合理，提高产品品质。
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公开(公告)号：CN101475609B
公开(公告)日：2011-03-23
申请号：CN200910025093.2
申请日：2009-02-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种木二糖的结晶方法，即在每1升pH4.0～9.0、10～200g/L的木二糖溶液中，加入1～80g的无机盐和0.67～19L的有机溶剂，结晶温度控制在10～40℃，搅拌转速控制在10～500r/min，结晶完毕后过滤，再用上述相同的有机溶剂洗涤，真空干燥，即得木二糖晶体。本发明方法具有稳定的结晶收率，提高了产品质量，改善了产品的外观和颗粒均一性，操作简便重复性好，适于大规模生产。
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公开(公告)号：CN1847254B
公开(公告)日：2010-05-05
申请号：CN200510094118.6
申请日：2005-08-30
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种将聚合度为2～8的低聚木糖中的木二糖、木三糖、木四糖、木五糖、木六糖、木七糖和木八糖制备分离的方法，其特征在于先用截留分子量为5000的超滤膜将低聚木糖和未降解的高聚物分离，再将超滤得到的低聚木糖混合物用聚丙烯酰胺凝胶为层析介质在层析分离柱上进行多次制备分离。采用本方法，可以将低聚木糖各组分进行有效的制备分离，纯度达到90％以上，可以为低聚木糖的生物活性研究和产品质量检测提供系列的单组分低聚木糖标准样品。
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