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公开(公告)号：CN101041815B
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN200710020522.8
申请日：2007-03-06
申请人： 南京大学医学院附属鼓楼医院
IPC分类号： C12N5/08
摘要： 本发明涉及一种利用可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养方法。本发明无菌收集人外周血，淋巴细胞分离液分离人外周血，将人外周血单个核细胞置于由含10％人AB血清、转铁蛋白、胰岛素组成的培养液中重悬细胞，放入孵育箱内培养，加入2ug/ml的sCD40L、CsA625ug/ml、2ng/ml的IL-4继续刺激培养。解决了现有方法存在的引入外源性的细胞，增加实验的干扰因素，无法供应临床的缺陷。本发明采用CD40配体体外刺激人外周血B细胞可产生B细胞大量持续培养，能从20ml外周血单个核细胞中持续大量培养B细胞。培养活化后的B细胞可以高表达MHC I、MHC II、CD80、CD86等抗原递呈的必需分子，有效提呈肿瘤细胞裂解物、抗原肽、抗原cDNA，甚至RNA，诱发特异性细胞免疫反应。
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公开(公告)号：CN103789261A
公开(公告)日：2014-05-14
申请号：CN201310616260.7
申请日：2013-11-26
申请人： 南京大学医学院附属鼓楼医院
IPC分类号： C12N5/0781
摘要： 本发明涉及一种新型特异性抗原负载诱导CTL的活化B细胞模型。本发明分离人外周血，得人外周血单个核细胞，CD20磁珠分离其中的B细胞，将其在孵育箱内培养，去除B细胞的PBMC，B细胞培养后进行HBcAg18-27多肽负载，加入多肽量为50ug／ml，负载时间为12～18小时，抗原负载后洗涤B细胞，去除B细胞的PBMC细胞内，B细胞与T细胞比例为1：10，继续培养4天后取出所培养细胞，五聚体技术检测HBV？HBcAg18-27多肽特异性CTL细胞。本发明解决了占外周血单个核细胞的比例在1％以下、扩增的效率不高，且培养时间长并且培养的费用高昂等缺陷。本发明建立了一种可靠和简单的细胞实验模型，避免了树突状细胞需要长时间培养并培养扩增效率低下的缺陷。
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公开(公告)号：CN101041815A
公开(公告)日：2007-09-26
申请号：CN200710020522.8
申请日：2007-03-06
申请人： 南京大学医学院附属鼓楼医院
IPC分类号： C12N5/08
摘要： 本发明涉及一种利用可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养方法。本发明无菌收集人外周血，淋巴细胞分离液分离人外周血，将人外周血单个核细胞置于由含10％人AB血清、转铁蛋白、胰岛素组成的培养液中重悬细胞，放入孵育箱内培养，加入2ug/ml的sCD40L、CsA 625ug/ml、2ng/ml的IL－4继续刺激培养。解决了现有方法存在的引入外源性的细胞，增加实验的干扰因素，无法供应临床的缺陷。本发明采用CD40配体体外刺激人外周血B细胞可产生B细胞大量持续培养，能从20ml外周血单个核细胞中持续大量培养B细胞。培养活化后的B细胞可以高表达MHC I、MHC II、CD80、CD86等抗原递呈的必需分子，有效提呈肿瘤细胞裂解物、抗原肽、抗原cDNA，甚至RNA，诱发特异性细胞免疫反应。
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