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公开(公告)号：CN102653756A
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN201110052372.5
申请日：2011-03-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及利用一种定向诱变动物基因组的方法。具体来说，本发明提供一种新的利用锌指核酸酶定向改造动物基因组的特定基因的方法，包括：根据目标动物靶基因区的序列设计特异识别并切割靶基因的锌指核酸酶，使用独立的表达系统验证所述锌指核酸酶对靶基因的定向切割能力和效率，利用选定的锌指核酸酶对目标动物的胚胎的靶基因进行定向遗传改造并获得稳定的遗传性状。进一步，本发明还涉及使用所述的独立表达系统，筛选利用所设计的锌指核酸酶所获得的主要的基因突变模式，并利用选定的突变模式高效筛选定向遗传改造所获得的子代。另一方面，本发明还涉及利用所述方法，获得能特异识别黄颡鱼肌肉生长抑制素基因的锌指核酸酶，并定向地敲除了黄颡鱼的肌肉生长抑制素基因。
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公开(公告)号：CN104195177B
公开(公告)日：2017-06-09
申请号：CN201410382563.1
申请日：2014-08-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/89
Abstract: 一种显著提高鱼类基因组编辑效率的方法，包括：设计特异性识别和切割鱼类基因组指定位点序列的基因组编辑工具、以及与所述指定位点序列相对应、包含敲入外源基因片段的同源供体，使用共显微注射的方法将所述基因组编辑工具、所述同源供体以及在原生殖细胞特异稳定表达荧光蛋白的mRNA导入到鱼类动物胚胎，利用检测所述荧光蛋白mRNA所表达的荧光蛋白进行胚胎挑选并获得稳定的遗传性状。该方法可以在鱼类基因组的指定位点敲入外源基因片段，获得带有敲入的外源基因片段的子一代鱼类的效率显著高于已有的方法。
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公开(公告)号：CN104195177A
公开(公告)日：2014-12-10
申请号：CN201410382563.1
申请日：2014-08-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/89
Abstract: 一种显著提高鱼类基因组编辑效率的方法，包括：设计特异性识别和切割鱼类基因组指定位点序列的基因组编辑工具、以及与所述指定位点序列相对应、包含敲入外源基因片段的同源供体，使用共显微注射的方法将所述基因组编辑工具、所述同源供体以及在原生殖细胞特异稳定表达荧光蛋白的mRNA导入到鱼类动物胚胎，利用检测所述荧光蛋白mRNA所表达的荧光蛋白进行胚胎挑选并获得稳定的遗传性状。该方法可以在鱼类基因组的指定位点敲入外源基因片段，获得带有敲入的外源基因片段的子一代鱼类的效率显著高于已有的方法。
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公开(公告)号：CN102653756B
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201110052372.5
申请日：2011-03-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及利用一种定向诱变动物基因组的方法。具体来说，本发明提供一种新的利用锌指核酸酶定向改造动物基因组的特定基因的方法，包括：根据目标动物靶基因区的序列设计特异识别并切割靶基因的锌指核酸酶，使用独立的表达系统验证所述锌指核酸酶对靶基因的定向切割能力和效率，利用选定的锌指核酸酶对目标动物的胚胎的靶基因进行定向遗传改造并获得稳定的遗传性状。进一步，本发明还涉及使用所述的独立表达系统，筛选利用所设计的锌指核酸酶所获得的主要的基因突变模式，并利用选定的突变模式高效筛选定向遗传改造所获得的子代。另一方面，本发明还涉及利用所述方法，获得能特异识别黄颡鱼肌肉生长抑制素基因的锌指核酸酶，并定向地敲除了黄颡鱼的肌肉生长抑制素基因。
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