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公开(公告)号：CN101886105A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910026562.2
申请日：2009-05-12
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明利用微型蛋白内含子制备胰高血糖素样肽-1。Ssp DnaB蛋白质内含子(intein)其N-末端的106个氨基酸(inteinN)和C-末端的48个氨基酸(intein C)，形成的Ssp DanB微型蛋白质内含子具有完整的剪接功能。将intein C与胰高血糖素样肽-1融合蛋白(inteinC-GLP)在大肠杆菌内进行表达，intein N在大肠杆菌中进行表达，并以Ni-Sepharose进行纯化。纯化后的inteinC-GLP与intein N在pH6.2的磷酸盐缓冲体系中进行拼接，释放出重组胰高血糖素样肽-1。拼接产物上样于Ni-Sepharose，GLP-1存在于穿过液中，其它蛋白被吸附于Ni-Sepharose柱上。将GLP-1粗品进一步浓缩纯化得到纯品，MALDI-TOF质谱分析，与理论分子量相符合。葡萄糖耐受实验结果证明，与对照相比GLP-1(7-36)能有效降低小鼠血糖水平。
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公开(公告)号：CN1706953A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055553.3
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
Abstract: 本发明属于生物制药领域中应用基因工程技术生产蛋白质药物的范畴。本发明公开了一种新的具有快速溶栓效果的人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体蛋白K2tPA的制备方法和应用。其制备方法是用基因工程技术构建了表达K2tPA的重组质粒，并实现了在大肠杆菌中的高效表达。将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵，每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g，纯度达95％以上，比活大于50万IU/mg，内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准，可用于心、脑血管疾病的血栓形成的治疗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1706946A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055550.X
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/16 , C12N15/70 , C07K1/14 , C07K14/435 , C07K14/575 , C07H21/00 , G01N33/68 , G01N33/74
Abstract: 本发明涉及医药生物工程技术领域，是一种重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法。本发明用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18－T载体中，经过KpnI/SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn－Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白－胸腺肽α1融合蛋白。经凝血因子Xa酶切、Zn－Sepharose亲和层析以及反向高效液相色谱纯化获得3.8mg重组人胸腺肽。小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系。
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公开(公告)号：CN1706944A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055547.8
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及一种治疗充血型心衰竭的多肽药物的表达、纯化及鉴定方法，属于生物技术制药中的基因工程生产多肽药物的技术领域。其目的是制备多肽药物重组人脑钠素(rhBNP)，用于治疗充血型心衰竭。重组人脑钠素(rhBNP)是用基因工程方法生产的多肽，利用硫氧还蛋白融合表达系统高效表达，经分离纯化获得目标多肽。体外活性测定结果表明，制备的重组人脑钠素(rhBNP)样品对兔胸主动脉条具有显著的血管舒张效应，具有和标准品相似的比活性。
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公开(公告)号：CN1706943A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055551.4
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
Abstract: 本发明涉及一种抑制尿激酶原(proUK)/尿激酶原受体(uPAR)相互作用的重组蛋白的制备方法和活性鉴定。由于uPA/uPAR在许多病理生理过程中发挥了重要的作用，阻断这一通路将会对疾病的发生和发展起到阻滞作用。本发明中制备的人尿激酶原氨基末端片段(ATF)通过体外活性鉴定表明其能够抑制尿激酶原与位于细胞表面的尿激酶原受体的结合。同时也能抑制尿激酶(UK)对纤溶酶原(plasminogen)以及纤溶酶(plasmin)对proUK的激活。这预示着rhATF可能在抑制uPA/uPAR参与的病理生理过程中发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN101884910A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910026561.8
申请日：2009-05-12
Applicant: 南京大学
Abstract: 具有反式剪切活性的蛋白质内含子的N-端剪接结构域和C-端剪接结构域之间能够特异性结合。本发明用蛋白质内含子的一个剪接结构域(N-或C-端剪接结构域)作为载体蛋白与目标多肽融合表达；将另一个剪接结构域(C-或N-端剪接结构域)与支持介质交联，制备亲和柱，用来吸附并纯化上述含有目标多肽的融合蛋白。通过增加亲和层析柱洗涤液中的盐浓度，去除融合蛋白样品中的杂质；通过改变层析柱的pH、温度、或者加入含巯基基团的化学试剂，诱导蛋白质内含子的反式剪切，使目标多肽从融合蛋白中释放出来，并同时获得纯化。
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公开(公告)号：CN1706947A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055552.9
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
IPC: C12N15/16 , C12N15/70 , C07K14/635 , A61K38/29
Abstract: 本发明涉及医药生物工程技术领域，是包括涉及编码人甲状旁腺激素小肽的cDNA，和利用其表达载体制备人甲状旁腺激素的方法。本发明将化学合成的重组人甲状旁腺激素(1－34)基因用PCR扩增后，克隆至表达载体pET－35b(+)，使重组人甲状旁腺激素(1－34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端，并得到高效表达。融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后，经Factor Xa裂解释放出rhPTH(1－34)，再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1－34)纯品。每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1－34)。经质谱测定，所得样品的分子量为4117.0道尔顿，与rhPTH(1－34)理论分子量一致。本发明极大程度上丰富了该多肽在医药生物工程技术领域的研究和开发。
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