公开(公告)号：CN104531607A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410836765.9

申请日：2014-12-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  郁磊 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁姗 ,  马可

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP-hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。

公开(公告)号：CN117384925A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202211510854.5

申请日：2022-11-29

Applicant: 南京农业大学 ,  江苏省农业科学院

Inventor： 刘永杰 ,  耿金柱 ,  董雨豪 ,  谢星 ,  冯志新 ,  宋錞燮

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/11 ,  C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种双荧光素报告IFN‑β启动子活性慢病毒质粒、报告细胞系及构建方法，本发明以plvx质粒为骨架通过引入Gluc分泌性荧光素酶基因作为报告基因，并且在该基因的下游反向串联Luc基因作为内参基因以归一化实验结果，合成了用于报告IFN‑β启动子活性的DNA片段组合物、构建了pIFNβ活性双荧光素酶报告系统稳转细胞系。本发明不仅解决了因为转染不同质粒的效率和细胞状态带来的实验差异，同时将分泌性荧光素酶报告基因和慢病毒包装系统结合使得整套系统更加适合高通量持续性实验的检测。

公开(公告)号：CN104293739B

公开(公告)日：2017-08-11

申请号：CN201410535918.6

申请日：2014-10-11

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁珊 ,  陆承平

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  A61K39/42 ,  A61P31/16

Abstract: 本发明提供了一种针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体，属于生物技术领域。利用2010年分离的H3N2犬流感病毒江苏分离株JS/10，接种10日龄SPF鸡胚，收集血凝效价大于等于6的尿囊液，纯化病毒接种MDCK细胞，皮内多点注射接种小鼠，细胞融合后，经三次ELISA检测已生成细胞集落的细胞上清，筛选出抗H3亚型杂交瘤细胞株mAb D7，中和抗体效价达1:12800，识别抗原鉴定证实其针对保守的HA2蛋白，抗体亚类为IgG2b。本发明制备针对H3N2犬流感病毒株JS/10 的保守的HA2蛋白单克隆抗体，为H3N2犬流感病毒感染的治疗提供了重要的免疫制剂，具有潜在的应用前景。

公开(公告)号：CN116656621A

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202310462267.1

申请日：2023-04-26

Applicant: 江苏省农业科学院 ,  南京农业大学

Inventor： 韦艳娜 ,  刘蓓蓓 ,  冯志新 ,  谢青云 ,  白昀 ,  刘斐 ,  李嘉豪 ,  陈蓉 ,  郝飞 ,  谢星 ,  邵国青

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  G01N33/533

Abstract: 本发明提供分泌抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。分泌抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F9，保藏编号为CCTCC NO：C2019271。本发明还提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体及其在检测非洲猪瘟病毒的蛋白免疫印迹中的应用、在制备检测非洲猪瘟病毒的量子点荧光试纸条方面的应用。采用该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能够高特异性高灵敏度地检测非洲猪瘟病毒。

公开(公告)号：CN104531607B

公开(公告)日：2017-11-07

申请号：CN201410836765.9

申请日：2014-12-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  郁磊 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁姗 ,  马可

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP‑hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。

公开(公告)号：CN104293739A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410535918.6

申请日：2014-10-11

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  谢星 ,  庞茂达 ,  林焱 ,  赵艳兵 ,  梁珊 ,  陆承平

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  A61K39/42 ,  A61P31/16

Abstract: 本发明提供了一种针对H3N2犬流感病毒HA2蛋白的单克隆抗体，属于生物技术领域。利用2010年分离的H3N2犬流感病毒江苏分离株JS/10，接种10日龄SPF鸡胚，收集血凝效价大于等于6的尿囊液，纯化病毒接种MDCK细胞，皮内多点注射接种小鼠，细胞融合后，经三次ELISA检测已生成细胞集落的细胞上清，筛选出抗H3亚型杂交瘤细胞株mAbD7，中和抗体效价达1:12800，识别抗原鉴定证实其针对保守的HA2蛋白，抗体亚类为IgG2b。本发明制备针对H3N2犬流感病毒株JS/10的保守的HA2蛋白单克隆抗体，为H3N2犬流感病毒感染的治疗提供了重要的免疫制剂，具有潜在的应用前景。