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公开(公告)号：CN114592090B
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202210190570.6
申请日：2022-02-28
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种鉴别基因Ⅰ型和Ⅱ型非洲猪瘟病毒的双重荧光定量PCR检测引物和探针及试剂盒，所述双重荧光定量PCR检测引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2和4～5所示。并进一步建立了检测方法和检测试剂盒。该方法特异性强，与其他病毒无交叉反应；灵敏度高，最低检测拷2贝数分别为1.07×10 copies/μL和3.13×104copies/μL；重复性好，Ct值变异系数均小于2％；应用该方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法检测结果一致。本发明建立的双重荧光定量PCR为鉴别基因I型和II型ASFV提供了快速检测方法，有利于完善中国针对ASF制定的高效防控措施。(56)对比文件Thi Bich Ngoc Trinh 等.Development ofa novel real-time PCR assay targeting p54gene for rapid detection of African swinefever virus (ASFV) strains circulating inVietnam《.VetMed Sci.》.2021,第7卷(第6期),第2268-2272页.Carmina Gallardo 等. Enhanceddiscrimination of African swine fevervirus isolates through nucleotidesequencing of the p54, p72, and pB602L(CVR) genes《.Virus Genes》.2009,第38卷(第1期),摘要，第86页右栏第2段至第92页左栏第1段.
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公开(公告)号：CN114395643A
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN202210156886.3
申请日：2022-02-21
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明涉及病毒检测领域，尤其涉及非洲猪瘟病毒的双通道数字PCR检测试剂盒及方法。本发明提供了非洲猪瘟病毒的双通道微滴数字PCR检测试剂盒及方法，可以检测到多种不同类型的毒株，并鉴别其是否为EP402R缺失株。此外，本发明提供的产品具有良好的特异性和灵敏度：在几种常见猪病病毒中仅扩增非洲猪瘟病毒、对pMD18T‑EP402R和pMD18T‑B646L质粒的最低检测限分别低至0.43copies/μL和2.6copies/μL。因此本发明有潜力准确检测非洲猪瘟病毒的隐性感染，可以应用于临床和生产中该猪瘟病毒特别是EP402R基因缺失株快速检测。
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公开(公告)号：CN114592090A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210190570.6
申请日：2022-02-28
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种鉴别基因Ⅰ型和Ⅱ型非洲猪瘟病毒的双重荧光定量PCR检测引物和探针及试剂盒，所述双重荧光定量PCR检测引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2和4～5所示。并进一步建立了检测方法和检测试剂盒。该方法特异性强，与其他病毒无交叉反应；灵敏度高，最低检测拷贝数分别为1.07×102copies/μL和3.13×104copies/μL；重复性好，Ct值变异系数均小于2％；应用该方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法检测结果一致。本发明建立的双重荧光定量PCR为鉴别基因I型和II型ASFV提供了快速检测方法，有利于完善中国针对ASF制定的高效防控措施。
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公开(公告)号：CN113215110A
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN202110521697.7
申请日：2021-05-13
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明提供了一种提高非洲猪瘟病毒增殖能力的方法，属于微生物应用领域。本发明方法包括如下步骤：S1、将猪原代肺泡巨噬细胞的细胞悬液接种于细胞培养板中，静置3～5h待其贴壁；S2、将非洲猪瘟病毒液和洁酸键稀释液均匀混合，24～26℃条件下孵育0～4h，加入培养基，得到混合液；用所得混合液替换细胞培养板中的培养液，培养1.5～2.5h；S3、用含10％胎牛血清的培养基再次替换细胞培养板中的培养液，培养4～6d。该方法不仅能够增强非洲猪瘟病毒的感染效率，节约实验室猪原代肺泡巨噬细胞的制备时间和成本，还能为高效地进行非洲猪瘟病毒的分离、疫情监测、疫苗的研发和生产提供基础数据支持。
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