公开(公告)号：CN112877215A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110227960.1

申请日：2021-03-02

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林瑞庆 ,  周德荣 ,  陆肖 ,  蔡晓懿 ,  方园婷 ,  蒋嘉豪 ,  孟甜 ,  王瑞珍 ,  翁亚彪

IPC: C12N1/10 ,  C12N1/02 ,  A01K67/02 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明提供一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的分离纯化方法和接种方法，涉及生物技术领域。本发明的分离纯化方法包括：取感染鸡粪便，加水，过滤；离心，沉淀加入饱和食盐水，离心，上清液加水得卵囊稀释液；离心，沉淀加入氯胺T溶液，得孢子化卵囊悬液；离心，沉淀加入饱和食盐水重悬，离心收集卵囊沉淀；加入次氯酸钠溶液重悬，收集卵囊；震荡破碎，待孢子囊全部逸出停止震荡，离心得到孢子囊，加入胰酶消化液进行消化，过滤离心收集沉淀，得柔嫩艾美耳球虫子孢子。本发明的接种方法是将上述孢子囊或子孢子精准注射于小鸡肌胃和小肠中段，实现成功感染。本发明的纯化方法得到的孢子囊和子孢子的纯化程度高，实验操作简便，注射接种后感染成功率达100％。

公开(公告)号：CN114164213A

公开(公告)日：2022-03-11

申请号：CN202111500852.3

申请日：2021-12-09

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林瑞庆 ,  方园婷 ,  周德荣 ,  翁亚彪 ,  陆肖 ,  蔡晓懿 ,  孟甜 ,  王瑞珍

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/79 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  C12N15/30 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明提供一种敲除MIC3基因的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向球虫MIC3基因的sgRNA，所述靶向球虫MIC3基因的sgRNA的靶点位于MIC3基因；由sgRNA、Cas9和同源重组质粒建立基因编辑系统，可精确地敲除球虫MIC3基因并同源重组荧光标记蛋白于MIC3基因，构建一种表达荧光标记蛋白的重组球虫载体。所述重组球虫载体的DNA经过PCR检测和测序，表明荧光标记基因已成功重组于MIC3基因，且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功敲除MIC3基因并表达荧光标记蛋白。

公开(公告)号：CN118186119A

公开(公告)日：2024-06-14

申请号：CN202410436217.0

申请日：2024-04-11

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林瑞庆 ,  卢逸雄 ,  张汉云 ,  张媛 ,  陆肖

IPC: C12Q1/6893 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开一种鉴定猫等孢球虫和芮氏等孢球虫的双重PCR检测引物组、检测方法及其应用。通过筛选得到一种猫等孢球虫和芮氏等孢球虫的双重PCR检测引物组，包括IFITS‑F6/R6和IRITS‑F6/R6引物对。基于所述双重PCR检测引物组合物建立了双重PCR‑HRM方法，所述方法仅扩增猫等孢球虫和芮氏等孢球虫，对猫等孢球虫和芮氏等孢球虫的检测最低限分别为1.04×101copies/μL和1.17×10‑1copies/μL。所述双重PCR‑HRM方法敏感性高，稳定、重现性好，对球虫检出率显著高于显微镜检测、巢式PCR检测，且能快速有效地区分猫等孢球虫与芮氏等孢球虫。

公开(公告)号：CN114164213B

公开(公告)日：2024-04-02

申请号：CN202111500852.3

申请日：2021-12-09

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林瑞庆 ,  方园婷 ,  周德荣 ,  翁亚彪 ,  陆肖 ,  蔡晓懿 ,  孟甜 ,  王瑞珍

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/79 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  C12N15/30 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明提供一种敲除MIC3基因的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向球虫MIC3基因的sgRNA，所述靶向球虫MIC3基因的sgRNA的靶点位于MIC3基因；由sgRNA、Cas9和同源重组质粒建立基因编辑系统，可精确地敲除球虫MIC3基因并同源重组荧光标记蛋白于MIC3基因，构建一种表达荧光标记蛋白的重组球虫载体。所述重组球虫载体的DNA经过PCR检测和测序，表明荧光标记基因已成功重组于MIC3基因，且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功敲除MIC3基因并表达荧光标记蛋白。

公开(公告)号：CN118127058A

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202410079688.0

申请日：2024-01-19

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林瑞庆 ,  梁香慧 ,  陆肖 ,  王瑞珍 ,  叶欣

IPC: C12N15/79 ,  C12N15/65 ,  A01K67/02 ,  G01N15/14 ,  G01N21/64 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明公开了一种筛选转基因巨型艾美耳球虫孢子化卵囊的方法，所述方法包括以下步骤：包括以下步骤：将转基因巨型艾美耳球虫卵囊破碎并分选得到转基因巨型艾美耳球虫孢子囊，然后将所述转基因巨型艾美耳球虫孢子囊接种雏鸡进行传代，得到巨型艾美耳球虫卵囊。该方法能有效提高目标卵囊接种后代后的阳性率，为选育稳定表达外源蛋白的转基因球虫株提供新的思路。

公开(公告)号：CN114426927A

公开(公告)日：2022-05-03

申请号：CN202111549216.X

申请日：2021-12-17

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 林瑞庆 ,  陆肖 ,  蔡晓懿 ,  周德荣 ,  孟甜 ,  方园婷 ,  王瑞珍 ,  翁亚彪

IPC: C12N1/10 ,  C12N1/02 ,  A61K39/012 ,  A61P33/02 ,  C12R1/90

Abstract: 本发明提供一种单个球虫卵囊的分离方法和应用，涉及球虫卵囊分离技术领域。本发明的分离方法，在透明的容器底部进行标记和定位，再取卵囊液滴加至凝胶上，通过显微镜观察凝胶表面上的滴液中是否含有单个卵囊，并对含有单个卵囊的位置进行记录，用吸管挖取空白凝胶作为封顶，再挖取含有单个卵囊滴液的凝胶作为垫底，如此可简便地将单个卵囊固定于凝胶块内。本发明的分离方法简单易操作，可缩短分离时间，提高分离效率。