公开(公告)号：CN117625666A

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202211020042.2

申请日：2022-08-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 江金飞 ,  冯赛祥 ,  赵一珊 ,  孙娟 ,  周梦若 ,  陈爱华 ,  梁铭治 ,  谢倩梅 ,  代绘琳 ,  张广文 ,  周紫晴 ,  王浠婕

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/52 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  A61K39/102 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种多杀性巴氏杆菌无抗性标记基因整合菌株的构建方法及其应用。本发明将点突变基因pheSm与温度敏感复制子Ts‑ori、卡那霉素抗性基因kan及大肠杆菌ColE1复制子构建得到温度敏感质粒pHYF01；接着通过无痕重组将质粒pHYF01与靶基因hptC的上、下同源臂片段连接构建得到重组质粒pHYF02；然后将重组质粒pHYF02电击转化禽多杀性巴氏杆菌，经卡那霉素筛选获得hptC重组菌株；再利用卡那霉素抗性筛选获得单交换菌株，利用四氯苯丙氨酸抗性筛选得到双交换菌株，即所述多杀性巴氏杆菌无抗性标记基因整合菌株。该整合菌株毒力显著降低，可用于开发禽多杀性巴氏杆菌疫苗。