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公开(公告)号：CN114051853A
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202010759073.4
申请日：2020-07-31
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01G7/00
Abstract: 本发明公开一种离体春梢快速鉴定高感松材线虫病马尾松的方法及其应用，涉及高度感松材线虫病马尾松的鉴定技术。该方法是一种通过确定拟评价马尾松的最小群体数量、每株马尾松的最少春梢数、春梢的采集技术，春梢的离体接种松材线虫的处理方式，以及接种后离体春梢的松材线虫数量，最后根据数理统计分析结果，鉴定出高度感病的活体马尾松植株的方法。本发明是一种全新的技术，在备好接种用松材线虫和马尾松苗木的前提下，单批样本仅需4天时间即可鉴定出四年生高度感病松材线虫马尾松，具有离体快速、环保、成本低的特点，鉴定出的高感马尾松不带松材线虫，可用于马尾松育种材料，具有广泛的应用前景，有利于大规模推广。
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公开(公告)号：CN109329217B
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201811146891.6
申请日：2018-09-29
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01K67/033
Abstract: 本发明公开了一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)将活的松材线虫配置成松材线虫悬浮液；(2)选取半年生马尾松苗梢头下3～5cm处的嫩梢部位，拔去针叶，然后在拔去针叶的马尾松嫩梢表皮处纵划两条或以上的伤口；(3)用封口膜在拔去针叶的部位围成不漏水的小漏斗；其中小漏斗的下方紧贴马尾松嫩梢处且与伤口下方齐平；(4)将松材线虫悬浮液注入到小漏斗中进行松材线虫的接种；(5)将接种松材线虫后的半年生马尾松苗放置于室外环境条件下进行培育。利用本发明的方法适用于人工接种松材线虫于半年生的马尾松苗木，能有效降低生产成本，具有广阔的应用前景和重要的生产意义。
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公开(公告)号：CN109329217A
公开(公告)日：2019-02-15
申请号：CN201811146891.6
申请日：2018-09-29
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01K67/033
Abstract: 本发明公开了一种半年生马尾松苗嫩梢表皮划伤法人工接种松材线虫的方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)将活的松材线虫配置成松材线虫悬浮液；(2)选取半年生马尾松苗梢头下3～5cm处的嫩梢部位，拔去针叶，然后在拔去针叶的马尾松嫩梢表皮处纵划两条或以上的伤口；(3)用封口膜在拔去针叶的部位围成不漏水的小漏斗；其中小漏斗的下方紧贴马尾松嫩梢处且与伤口下方齐平；(4)将松材线虫悬浮液注入到小漏斗中进行松材线虫的接种；(5)将接种松材线虫后的半年生马尾松苗放置于室外环境条件下进行培育。利用本发明的方法适用于人工接种松材线虫于半年生的马尾松苗木，能有效降低生产成本，具有广阔的应用前景和重要的生产意义。
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公开(公告)号：CN105675375A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610025221.3
申请日：2016-01-13
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N1/34
CPC classification number: G01N1/34
Abstract: 本发明属于植物样品内失活线虫的分离技术领域，公开了一种马尾松病死木中失活线虫的分离液及其分离方法和试剂盒。该分离液由pH为4.40的盐酸溶液、纤维素酶和果胶酶组成，纤维素酶和果胶酶的浓度分别为0.005和0.001mg/μl。马尾松病死木中失活线虫的分离方法按照以下步骤：将马尾松病死木材料纵切成长0.8～1.0cm，厚0.1～1mm的切片置于离心管；移取2000μl分离液于装有切片的离心管，用镊子使切片全部浸入溶液；把离心管固定在恒温振荡器中，采用50℃和250R振荡6h。本发明的分离技术，扩大了可用于检测线虫的样本来源，提高了分离效率。本发明的分离技术简单高效，可制备成试剂盒进行大规模推广。
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公开(公告)号：CN105463113B
公开(公告)日：2018-09-07
申请号：CN201610023504.4
申请日：2016-01-14
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6841
Abstract: 本发明公开了一种雌根结线虫食道腺基因原位杂交技术及其应用，属于雌根结线虫基因表达检测技术领域。本发明针对雌根结线虫虫体易破裂的特点，在原位杂交的过程中采用针灸针在雌根结线虫成虫的前体部轻轻地扎1‑2个小孔，提供了避免虫体破裂的方法；本发明还提供了雌根结线虫的固定技术；本发明改用96孔板实验可以减少虫体挪动，避免了离心管中因大量虫子聚集挤压造成的变形，而且雌虫体积较大，较重，不需要离心即能沉到底部，省去离心的步骤，能更好的维持虫体不变形。通过技术创新，在南方根结线虫雌成虫食道腺中实现了基因的原位杂交。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108007755A
公开(公告)日：2018-05-08
申请号：CN201710970539.3
申请日：2017-10-18
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种有效观察番茄根结巨型细胞石蜡切片方法，本方法对影响番茄根结巨型细胞石蜡切片效果的三个关键因素进行了研究，建立了包括新的取材，包埋方式以及挑片技术的番茄根结巨型细胞石蜡切片技术。本发明的技术，明显提高了番茄根结石蜡切片的工作效率，提高了挑片质量，保证了番茄根结巨型细胞石蜡切片的效果。该方法实操性强，技术参数明确，可用于开发相关的石蜡切片包埋模具及配套使用的石蜡切片专用技术，进行广泛推广应用。
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公开(公告)号：CN107702966A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201710840101.3
申请日：2017-09-18
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N1/30
Abstract: 本发明公开了一种制作空心菜根结巨型细胞石蜡切片的方法，该方法在常规石蜡切片技术上，对染色、横切切片角度和脱蜡等步骤进行了改进。采用爱利氏苏木精染液进行植物组织的染色，将传统的脱蜡后染色改为脱蜡前整体染色。切片角度采用横切，切片厚度为5-10μm。本发明还改进了脱蜡方式，采用TO型生物制片透明剂代替二甲苯进行脱蜡。本发明空心菜根结巨型细胞石蜡切片的制作方法，明显提高了空心菜根结石蜡切片的染色效果，提高工作效率，保证了空心菜巨型细胞石蜡切片的效果。
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公开(公告)号：CN101878756B
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN200910194044.1
申请日：2009-11-20
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01N1/02 , C12Q1/68 , G01N27/447
Abstract: 本发明公开了松褐天牛样本的保存方法及其体内松材线虫的快速检测方法。本发明将捕捉到的松褐天牛样本置于75％的酒精或-70℃冰箱中保存，最大限度地保存了松褐天牛携带的松材线虫的数量，本发明创建了上述保存状态的松褐天牛中松材线虫DNA模板制备技术，直接将松褐天牛成虫的中后胸气管组织进行冻融、裂解、离心后用于PCR扩增，扩增效率达到100％，加快了检测的速度，提高检测的准确度，达到了简易、快速、准确的检测目的。
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公开(公告)号：CN101731103B
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN200910194215.0
申请日：2009-11-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种番茄植株地上部人工接种根结线虫的方法，将番茄地上部接种部位表面消毒后，将含根结线虫2龄幼虫的悬浮液接种到接种部位，最早8天后即可检查接种效果。本发明选择合适的根结线虫接种材料配合番茄植株不同的叶、芽、茎部生长期材料，提供了接种用根结线虫悬浮液的制备以及接种番茄的培育方案，确定了表面消毒、人工接种和保湿技术，建立了容易操作、接种结果直观、可以重复接种和定点定量接种的番茄叶、芽、茎部根结线虫接种方法，简单易行，易于推广。
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公开(公告)号：CN101731103A
公开(公告)日：2010-06-16
申请号：CN200910194215.0
申请日：2009-11-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种番茄植株地上部人工接种根结线虫的方法，将番茄地上部接种部位表面消毒后，将含根结线虫2龄幼虫的悬浮液接种到接种部位，最早8天后即可检查接种效果。本发明选择合适的根结线虫接种材料配合番茄植株不同的叶、芽、茎部生长期材料，提供了接种用根结线虫悬浮液的制备以及接种番茄的培育方案，确定了表面消毒、人工接种和保湿技术，建立了容易操作、接种结果直观、可以重复接种和定点定量接种的番茄叶、芽、茎部根结线虫接种方法，简单易行，易于推广。
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