公开(公告)号：CN110295161B

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN201910639321.9

申请日：2019-07-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 莫美华 ,  王越 ,  梁大伟 ,  马建伟 ,  陈梅梅 ,  马紫英 ,  倪焱

IPC: C12N15/04 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种巨大口蘑和双孢蘑菇的原生质体融合方法。本发明是将巨大口蘑和双胞蘑菇的菌丝体酶解得到原生质体，以巨大口蘑原生质体紫外灭活，双孢蘑菇原生质体热灭活做为标记，采用PEG介导的化学融合方法将巨大口蘑原生质体和双孢蘑菇的原生质体融合，融合子再生，综合验证，获得融合菌株。本发明的方法能够有效将巨大口蘑和双孢蘑菇的原生质体融合，提高选育目的新菌株的成功概率，转化率为80～120％，获得的巨大口蘑新菌株产量高达亩产3000～5000公斤，在8～12℃条件下贮藏30天不变色、不变味，在26～30℃条件下均能生长。

公开(公告)号：CN102559576A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201210018448.7

申请日：2012-01-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 莫美华 ,  马建伟 ,  梁大伟 ,  陈梅梅 ,  马紫英 ,  倪炎

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开一种巨大口蘑原生质体的制备方法。所述制备方法，包括如下步骤：用渗透压稳定剂对巨大口蘑菌丝进行预处理，然后采用蜗牛酶与纤维素酶组成的混合酶液对巨大口蘑菌丝进行酶解，所述混合酶液中，纤维素酶的质量浓度为3.5～4.0％，蜗牛酶的质量浓度为0.5～1.0％，余量为渗透压稳定剂；最后对酶解液进行过滤，离心，所得沉淀即为巨大口蘑原生质体。本发明所用的混合酶液比单一的溶壁酶价格低一半以上，大大降低了科研中巨大口蘑原生质体的制备费用，为利用原生质体技术进行巨大口蘑育种和基因工程奠定了基础；同时，本发明的巨大口蘑原生质体的制备方法成本比传统的制备方法降低一半以上，而且得到的原生质体释放量和再生率均处于较高水平。

公开(公告)号：CN110295161A

公开(公告)日：2019-10-01

申请号：CN201910639321.9

申请日：2019-07-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 莫美华 ,  王越 ,  梁大伟 ,  马建伟 ,  陈梅梅 ,  马紫英 ,  倪焱

IPC: C12N15/04 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种巨大口蘑和双孢蘑菇的原生质体融合方法。本发明是将巨大口蘑和双胞蘑菇的菌丝体酶解得到原生质体，以巨大口蘑原生质体紫外灭活，双孢蘑菇原生质体热灭活做为标记，采用PEG介导的化学融合方法将巨大口蘑原生质体和双孢蘑菇的原生质体融合，融合子再生，综合验证，获得融合菌株。本发明的方法能够有效将巨大口蘑和双孢蘑菇的原生质体融合，提高选育目的新菌株的成功概率，转化率为80～120％，获得的巨大口蘑新菌株产量高达亩产3000～5000公斤，在8～12℃条件下贮藏30天不变色、不变味，在26～30℃条件下均能生长。

公开(公告)号：CN102492649A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110410955.0

申请日：2011-12-12

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 莫美华 ,  梁大伟

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开一种双孢蘑菇原生质体及其制备方法。该制备方法如下：将菌龄为6～9d的双孢蘑菇菌丝用0.6mol/L KCl与0.6mol/L的甘露醇以体积比1∶1混合制得的渗透压稳定剂预处理后，于28～30℃用含有质量浓度为7.6％的纤维素酶和4％蜗牛酶的混合酶液酶解2～3h，然后离心分离，得到双孢蘑菇原生质体，该原生质体释放量达到9.9×106个/mL，在再生培养基中再生率达到2.11％。本发明采用纤维素酶和蜗牛酶作为混合酶系，比单一的溶壁酶价格低一半以上，降低了科研中双孢蘑菇原生质体的制备费用，为利用原生质体技术进行双孢蘑菇育种奠定了基础。

公开(公告)号：CN102559576B

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201210018448.7

申请日：2012-01-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 莫美华 ,  马建伟 ,  梁大伟 ,  陈梅梅 ,  马紫英 ,  倪炎

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开一种巨大口蘑原生质体的制备方法。所述制备方法，包括如下步骤：用渗透压稳定剂对巨大口蘑菌丝进行预处理，然后采用蜗牛酶与纤维素酶组成的混合酶液对巨大口蘑菌丝进行酶解，所述混合酶液中，纤维素酶的质量浓度为3.5～4.0％，蜗牛酶的质量浓度为0.5～1.0％，余量为渗透压稳定剂；最后对酶解液进行过滤，离心，所得沉淀即为巨大口蘑原生质体。本发明所用的混合酶液比单一的溶壁酶价格低一半以上，大大降低了科研中巨大口蘑原生质体的制备费用，为利用原生质体技术进行巨大口蘑育种和基因工程奠定了基础；同时，本发明的巨大口蘑原生质体的制备方法成本比传统的制备方法降低一半以上，而且得到的原生质体释放量和再生率均处于较高水平。