公开(公告)号：CN113913560A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111421961.6

申请日：2021-11-26

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 宋长绪 ,  刘献辉 ,  李赞 ,  张歆明 ,  徐舸 ,  王琳 ,  徐铮 ,  张乐宜 ,  刘燕玲

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开一种猪类圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：（1）根据PCL病毒的上传基因组序列设计特定的引物，并构建了目的基因质粒做标准品；（2）再进行敏感性验证；（3）最后进行特异性鉴定分析。本发明的检测方法特异性高，敏感性高，可用于用来监测病毒的流行情况。

公开(公告)号：CN113588613A

公开(公告)日：2021-11-02

申请号：CN202110855478.2

申请日：2021-07-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 宋长绪 ,  刘献辉 ,  洪林君 ,  张歆明 ,  徐舸 ,  熊谋康 ,  张乐宜 ,  刘艳玲 ,  徐铮

IPC: G01N21/64 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定，采用永生化猪胚胎滋养层细胞作为一种新颖的细胞器来研究猪伪狂犬病毒和繁殖障碍疾病的联系，永生化的滋养层细胞系可高效/稳定的传代，且培养体系成熟。本发明的细胞系能支持PRV的复制，确定了PRV对永生化猪胚胎滋养层细胞能较好的感染，引起细胞病变，且与PRV感染传代细胞PK15的TCID50相差不到一个滴度，可以用于PRV的传代及受体方面，PRV引起繁殖障碍疾病等方面的机制等研究。且本发明中传代滋养层细胞系的建立对于猪相关病毒的垂直传播研究及猪育种方面的相关研究有重要意义。

公开(公告)号：CN113234665A

公开(公告)日：2021-08-10

申请号：CN202110523944.7

申请日：2021-05-13

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 宋长绪 ,  洪林君 ,  刘献辉 ,  周臣 ,  张歆明 ,  徐舸 ,  刘燕玲 ,  张乐宜

IPC: C12N5/071 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开一种可供PEDV复制用的原代子宫内膜细胞系及其分离方法，所述的原代子宫内膜细胞系通过以下步骤获得：（1）取健康的成年母猪子宫，用含有双抗的PBS缓冲液冲洗干净，剪开子宫内膜，PBSS缓冲液冲洗干净；（2）采取猪子宫内膜上皮，将其剪至1mm3的小块，用PBS缓冲液清洗后，加入两倍体积的0.1%胶原蛋白酶（0.1mg/ml），消化2小时，期间晃动使其能均匀消化；随加入等体积含有10%血清的细胞培养基终止其消化；（3）采用100nm的细胞筛过筛，500g离心5min，弃上清，沉淀为猪子宫内膜上皮细胞；（4）将沉淀加入培养基，重悬培养，得到的猪子宫内膜细胞，继续传代7‑8次，或者将其冻存到液氮中存放。本发明的细胞系能实现PEDV对原代猪子宫内膜细胞能较好的感染。