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公开(公告)号：CN112680477A
公开(公告)日：2021-04-20
申请号：CN202011629470.6
申请日：2020-12-30
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于生物领域，公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法，包括如下步骤：步骤1：提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA，并根据RNA获得病毒的cDNA；步骤2：以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物；步骤3：将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段；步骤4：将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒；步骤5：将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞，得到重组的H9N2病毒；其中，8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：17所示。该方法的优势在于：操作简单、重组精确、拯救效率高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115612693A
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202210772628.8
申请日：2022-06-30
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV载体、PRRSV重组病毒及其构建方法和应用，属于生物技术领域，以PBR322作为基础载体，包括PRRSV基因组全长cDNA序列和p30蛋白基因序列，PRRSV基因组全长cDNA序列如SEQ ID No.1所示，p30蛋白基因序列插入到PRRSV基因组全长cDNA序列的ORF1b和ORF2a之间的区域，在插入p30蛋白基因序列的PRRSV基因组全长cDNA序列的上游设置位于CMV启动子，即得到表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV载体。该重组载体保真度高，构建便捷效率高。
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公开(公告)号：CN116334133A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210830659.4
申请日：2022-07-14
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司
Abstract: 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV D117L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P17、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P17质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P17质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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公开(公告)号：CN115612696A
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202210770868.4
申请日：2022-06-30
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明公开了一种PRRSV基因组全长cDNA全长质粒、PRRS病毒及其构建方法和应用，属于生物技术领域，以PBR322作为基础载体，包括PRRSV基因组全长cDNA序列和CMV启动子序列，bGH poly(A)signal序列，CMV启动子序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的上游，bGH poly(A)signal序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的下游，PRRSV基因组全长cDNA全长质粒为pBR322‑CMV‑rJXA1R，其序列如如SEQ ID No.1所示。该PRRSV基因组全长cDNA全长质粒保真度高，构建便捷效率高。
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公开(公告)号：CN112680477B
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202011629470.6
申请日：2020-12-30
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于生物领域，公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法，包括如下步骤：步骤1：提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA，并根据RNA获得病毒的cDNA；步骤2：以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物；步骤3：将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段；步骤4：将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒；步骤5：将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞，得到重组的H9N2病毒；其中，8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：17所示。该方法的优势在于：操作简单、重组精确、拯救效率高。
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公开(公告)号：CN115927458A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210830662.6
申请日：2022-07-14
Applicant: 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV E183L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P54、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P54质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P54质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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