公开(公告)号：CN115976156A

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202211603783.3

申请日：2022-12-13

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 卢丽丽 ,  段飞宇 ,  张敬文

IPC: C12Q1/48 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种GPI转酰胺酶的酶活测定方法。该方法是以丙氨酸‑苏氨酸‑赖氨酸‑天冬氨酸‑7‑氨基‑4‑甲基香豆素为底物，使用待测GPI转酰胺酶水解该底物，测定荧光强度，然后根据7‑氨基‑4‑甲基香豆素标准品的线性关系回归方程计算待测GPI转酰胺酶的相应酶活。本发明设计并合成的多肽底物A‑T‑K‑D‑7‑氨基‑4‑甲基香豆素亲水性较好，溶解度大，其疏水系数为‑6.3，容易构建酶反应体系。基于该多肽底物，本发明提供了一种测定GPI转酰胺酶活性的新方法，实现了GPI转酰胺酶的定量分析。

公开(公告)号：CN116064477A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202210818850.7

申请日：2022-07-12

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 卢丽丽 ,  张敬文 ,  段飞宇 ,  玄泽慧

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/12 ,  C12P19/00 ,  C12P19/14 ,  C12P19/44 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种糖苷酶家族43的β‑糖苷酶及其编码基因与应用。所述糖苷酶家族43的β‑糖苷酶来源于山东泰安土壤宏基因组，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明提供了一种新型GH43的β‑糖苷酶基因，为低聚半乳糖、烷基半乳糖苷、酪醇半乳糖苷等产品的合成提供了新的工具酶。本发明提供的β‑糖苷酶能以半乳糖为底物直接合成低聚半乳糖，与传统的以乳糖底物合成寡糖的工艺显著不同，使用本发明β‑糖苷酶反应获得的低聚半乳糖粗品不含葡萄糖，容易纯化获得纯品供糖尿病患者使用，拓展应用范围；该酶还能够以半乳糖为糖基供体、多种羟基化合物为受体合成糖苷产物，在食品、医药、化工等领域有重要应用价值。

公开(公告)号：CN115094104A

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN202210818830.X

申请日：2022-07-12

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 卢丽丽 ,  段飞宇 ,  王珂 ,  文焰

IPC: C12P19/14 ,  C12P19/44 ,  C12N11/00 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种利用固定化细胞以单糖为糖基供体合成烷基半乳糖苷的方法。包括：(1)培养产β‑半乳糖苷酶的酵母；(2)使用乙醇处理酵母细胞；(3)向乙醇处理后的酵母细胞中加入京尼平，构建交联体系；将交联体系反应0.5～4h，离心，得到固定化细胞；(4)将半乳糖和烷基醇混合均匀，加入固定化细胞，反应2～16h，经离心固液分离，取上清液，得到烷基半乳糖苷。本发明提供了一种绿色高效合成烷基半乳糖苷的方法，首次采用固定化酵母细胞以单糖为糖基供体一步合成糖苷。反应体系完成后仅含有烷基糖苷与剩余底物，产物种类少，容易纯化，适合于烷基糖苷的大规模合成，具有广大的应用前景。

公开(公告)号：CN116064477B

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202210818850.7

申请日：2022-07-12

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 卢丽丽 ,  张敬文 ,  段飞宇 ,  玄泽慧

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/12 ,  C12P19/00 ,  C12P19/14 ,  C12P19/44 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种糖苷酶家族43的β‑糖苷酶及其编码基因与应用。所述糖苷酶家族43的β‑糖苷酶来源于山东泰安土壤宏基因组，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明提供了一种新型GH43的β‑糖苷酶基因，为低聚半乳糖、烷基半乳糖苷、酪醇半乳糖苷等产品的合成提供了新的工具酶。本发明提供的β‑糖苷酶能以半乳糖为底物直接合成低聚半乳糖，与传统的以乳糖底物合成寡糖的工艺显著不同，使用本发明β‑糖苷酶反应获得的低聚半乳糖粗品不含葡萄糖，容易纯化获得纯品供糖尿病患者使用，拓展应用范围；该酶还能够以半乳糖为糖基供体、多种羟基化合物为受体合成糖苷产物，在食品、医药、化工等领域有重要应用价值。

公开(公告)号：CN115181765A

公开(公告)日：2022-10-14

申请号：CN202210818848.X

申请日：2022-07-12

Applicant: 华中科技大学

Inventor： 卢丽丽 ,  王珂 ,  段飞宇

IPC: C12P19/00 ,  C12P19/04 ,  C12P19/12 ,  C12N11/00 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种无载体固定化酵母细胞及其在合成低聚半乳糖中的应用。包括：(1)培养产β‑半乳糖苷酶的酵母；(2)使用乙醇悬浮酵母细胞，搅拌，离心；(3)向乙醇处理后的酵母细胞中加入京尼平，构建交联体系；(4)将交联体系反应0.5～4h，离心，得到无载体固定化酵母细胞。本发明还提供该方法制备的无载体固定化酵母细胞，以及该无载体固定化酵母细胞在合成低聚半乳糖中的应用。本发明首次采用京尼平与酵母细胞直接交联，不需要额外添加载体材料，具有成本低、易于操作、稳定性高的优点。本发明首次采用无载体固定化酵母细胞以单糖为底物合成低聚半乳糖，反应体系除了产物之外只存在剩余单糖底物，无乳糖反应体系中的水解副反应。