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公开(公告)号：CN101736085A
公开(公告)日：2010-06-16
申请号：CN200910272782.3
申请日：2009-11-18
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于动物病原分子检测领域，涉及牛支原体的环介导等温扩增检测方法。其步骤包括：(1)引物合成：根据牛支原体特异性基因UvrC的序列设计两对特异引物；(2)培养牛支原体；(3)提取牛支原体总DNA；(4)环介导等温扩增反应和(5)环介导等温扩增反应产物分析。在凝胶成像系统的紫外灯下观察是否有梯形条带，且其中最小的一条为157bp大小，或加入SYBR Green I后，若扩增产物变为黄绿色则为牛支原体阳性，若扩增产物为棕色则为牛支原体阴性。本发明可以100％扩增到临床分离到的牛支原体，且特异性强，对呼吸道常见菌可以作鉴别检测。本发明灵敏度高，检测下限为10个拷贝的阳性质粒。1小时出结果。实用性强，不需要昂贵的精密仪器。
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公开(公告)号：CN102220263B
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201110117094.7
申请日：2011-05-06
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种牛支原体致弱菌株及其应用，其步骤是A．分离鉴定牛支原体强毒株：通过病原分离培养、PCR检测，确定其病原为牛支原体B．牛支原体弱毒株的培育：将分离到的牛支原体在体药物体培养基，于培养箱中培养，培养基从红色变成透亮的黄色。.从上一代菌液取出1μL，接种PPLO培养基，培养。C．试验表明，该代次牛支原体已充分致弱。通过形态学检测，试验结果验证了由牛支原体MbovHB0801培育的150代传代菌株MbovHB0801-150.2。D．该牛支原体致弱株MbovHB0801-150.2，CCTCCNO：M2011102。具有良好的疫苗开发前景和广阔的临床应用价值，成本低、对动物体刺激性小，产生巨大的经济效益和社会效益。
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公开(公告)号：CN102220263A
公开(公告)日：2011-10-19
申请号：CN201110117094.7
申请日：2011-05-06
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种牛支原体致弱菌株及其应用，其步骤是A．分离鉴定牛支原体强毒株：通过病原分离培养、PCR检测，确定其病原为牛支原体。B．牛支原体弱毒株的培育：将分离到的牛支原体在体药物体培养基，于培养箱中培养，培养基从红色变成透亮的黄色。从上一代菌液取出1μl，接种PPLO培养基，培养。C．试验表明，该代次牛支原体已充分致弱。通过形态学检测，试验结果验证了由牛支原体MbovHB0801培育的150代传代菌株MbovHB0801-150.2。D．该牛支原体致弱株MbovHB0801-150.2，CCTCC M2011102。具有良好的疫苗开发前景和广阔的临床应用价值，成本低、对动物体刺激性小，产生巨大的经济效益和社会效益。
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公开(公告)号：CN101736085B
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN200910272782.3
申请日：2009-11-18
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于动物病原分子检测领域，涉及牛支原体的环介导等温扩增检测方法。其步骤包括：(1)引物合成：根据牛支原体特异性基因UvrC的序列设计两对特异引物；(2)培养牛支原体；(3)提取牛支原体总DNA；(4)环介导等温扩增反应和(5)环介导等温扩增反应产物分析。在凝胶成像系统的紫外灯下观察是否有梯形条带，且其中最小的一条为157bp大小，或加入SYBR Green I后，若扩增产物变为黄绿色则为牛支原体阳性，若扩增产物为棕色则为牛支原体阴性。本发明可以100％扩增到临床分离到的牛支原体，且特异性强，对呼吸道常见菌可以作鉴别检测。本发明灵敏度高，检测下限为10个拷贝的阳性质粒。1小时出结果。实用性强，不需要昂贵的精密仪器。
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