公开(公告)号：CN107254518A

公开(公告)日：2017-10-17

申请号：CN201710374609.9

申请日：2017-05-24

Applicant: 中山大学

Inventor： 黄志坚 ,  曾燊正 ,  刘健 ,  侯冬伟 ,  何建国

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种肠道细菌抗生素抗性基因的定量检测方法。包括如下步骤：S1.提取肠道细菌总DNA；S2.以肠道细菌总DNA为模板，PCR扩增抗生素抗性基因和16S rRNA基因，将扩增产物连接至克隆载体，然后转化宿主菌，获得阳性克隆；将阳性克隆扩繁后抽提质粒，测定其拷贝浓度，10倍梯度稀释成标准品模板，通过荧光定量PCR检测建立拷贝数与Ct值之间的标准曲线；S3.将阳性质粒和样品进行荧光定量PCR扩增，计算样品中携带的抗生素抗性基因拷贝数，得到抗生素抗性基因的相对含量。本发明方法安全环保，价格低廉，步骤简单，耗时短，结果稳定可靠，重复性好，灵敏度高，实用性强，简便快速，具有十分广阔的应用前景。