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公开(公告)号：CN103436490A
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201310400065.0
申请日：2013-09-05
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
Abstract: 本发明涉及一种昆明裂腹鱼鳍细胞系的构建和超低温冷冻保存方法，属淡水水生生物细胞培养和超低温冷冻保存技术领域。该方法是以昆明裂腹鱼腹鳍组织为材料，采用组织块法，在含有胎牛血清和细胞生长因子，pH值为7.0-7.2的DMEM/F12培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养；具体包括制备细胞培养液、原代培养及传代培养步骤。本发明的有益效果在于：1、原代培养耗时短，细胞量大，能用于染色体分析；2、构建的昆明裂腹鱼鳍细胞系形态为成纤维样，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，满足了对昆明裂腹鱼种质资源保存和理论研究及应用的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍细胞系。
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公开(公告)号：CN102766595B
公开(公告)日：2013-11-20
申请号：CN201210288477.5
申请日：2012-08-07
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
IPC: C12N5/077
Abstract: 本发明涉及一种鱇浪白鱼心脏细胞系的构建方法，属于淡水生物细胞培养技术领域。该方法以鱇浪白鱼心脏组织为材料，清洗剪碎后，采用透明质酸酶和II型胶原酶联合消化获得游离心脏细胞和疏松组织块，接种于25 cm2培养瓶中，加入含有胎牛血清、人碱性成纤维细胞生长因子和硫酸软骨素的L-15培养液，置于28℃培养箱培养。每隔3天半更换培养液，待细胞长成单层后，采用胰蛋白酶消化法进行传代。本发明的有益效果在于：1、操作简便；2、构建的鱇浪白鱼心脏细胞系的细胞生长状态良好，形态为成纤维样细胞，能连续传代40代以上，直接用于环境毒理学研究环境污染物的模型，进行污染检测和安全性评价； 3、该方法也适用于其他鱼类构建心脏细胞系。
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公开(公告)号：CN102757932A
公开(公告)日：2012-10-31
申请号：CN201210277861.5
申请日：2012-08-07
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
Abstract: 本发明涉及一种滇池金线鲃鳍细胞系的构建方法，属于淡水水生生物细胞培养技术领域。该方法是以滇池金线鲃鳍条组织为材料，采用组织块法，在含有胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子，pH值为7.2-7.4的L-15培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行继代培养；具体包括制备细胞培养液、鳍组织微创取样、原代培养及传代培养步骤。本发明的有益效果在于：1、采用微创处理，在保证鱼体存活的前提下，操作简便易行；2、构建的滇池金线鲃鳍细胞系形态为成纤维样，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，满足了对滇池金线鲃种质资源保存和理论研究及应用的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍条的细胞系。
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公开(公告)号：CN102757933B
公开(公告)日：2013-10-23
申请号：CN201210277865.3
申请日：2012-08-07
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
Abstract: 本发明涉及一种鱇浪白鱼肌肉细胞系的构建方法，属于淡水生物细胞培养技术领域。该方法首先配制细胞培养液，以鱇浪白鱼肌肉组织为材料，清洗剪碎后，接种于25cm2培养瓶中，置于28℃培养箱培养。每隔3天半量更换培养液，待细胞长成单层后，采用胰蛋白酶消化法进行传代。5天传代一次，传至第10代时，培养液中血清浓度降至10%，此时细胞系建立成功。本发明的有益效果在于：1.操作简便易行；2.所构建的鱇浪白鱼肌肉细胞系（AGM）细胞生长状态良好，形态为成纤维样细胞，能连续传代50代以上，能直接用于鱇浪白鱼细胞生物学特性及免疫抗病基因功能的研究；3.该构建方法也适用于其他鱼类肌肉细胞系。
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公开(公告)号：CN102763641A
公开(公告)日：2012-11-07
申请号：CN201210277918.1
申请日：2012-08-07
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
Abstract: 滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法，属于低温生物学技术领域。方法为：选择性成熟的优质原种或良种，用100 ppm的MS-222麻醉5 min，挤压擦干的腹部，成熟精液流入1.5 mL离心管，检测鲜精活力，活力在85%以上的精液用于冷冻。将精液与抗冻液（D-15+7.5%乙二醇）按体积比1：2的比例稀释，分装，4℃平衡60 min，在液氮面上方6 cm处平衡2 min，液氮面上平衡2 min后投入液氮中保存。精子复苏方法是在37℃水浴快速晃动20 s解冻，将挤出的滇池金线鲃鱼卵与解冻后的精液按1：105的数量比混合使卵受精。本发明具有成本低，操作简便，保存时间长，复苏后精子的活力较高，人工繁殖的滇池金线鲃鱼的受精率和孵化率较高，能投入规模生产的优点；对于开展鱼类资源恢复与重建也具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102757934A
公开(公告)日：2012-10-31
申请号：CN201210277940.6
申请日：2012-08-07
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
Abstract: 本发明涉及一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，属于淡水水生生物细胞培养技术领域。鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，是以鱇浪白鱼尾鳍组织细胞为材料，采用组织块法启动原代培养，在含有胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子的pH值为7.0-7.4的DMEM/F12培养基中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。本发明的有益效果在于：1、在保证鱼体存活的前提下，操作简便易行；2、构建的鱇浪白鱼鳍细胞系（AGF）形态为成纤维样细胞，细胞生长状态良好，能够连续传代，直接用于鱇浪白鱼细胞生物学特性及功能基因的研究，满足了对鱇浪白鱼分子细胞水平理论研究的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍条的细胞系。
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公开(公告)号：CN101779605B
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN201010114389.4
申请日：2010-02-26
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
CPC classification number: Y02A40/81
Abstract: 本发明涉及一种抚仙金线鲃的人工受精方法，属鱼产品养殖技术领域。本发明方法如下：采用湿法受精。将粘附着受精卵的棕片放入50ppm的水霉灵水溶液中消毒20分钟，取出挂在20m2孵化池中进行孵化。水温18-20℃，pH7.5-8.0，用氧气泵进行增氧，水中溶氧6.5-8.0/L；每隔24小时以同样的方法消毒一次，连续消毒3天，144小时完成孵化。驯养水位保持在1.0-1.2m，水温16-21℃，水中溶氧6.5-8.0/L；用遮光网遮盖池面2/3遮光，并在出水口用40目纱窗网拦截防逃；前7天投喂水生昆虫和水蚯蚓；转食期投喂15天蛋白含量较高的粉状饲料拌上10％鱼粉。定型期投喂粗蛋白含量34％的颗粒饵料。本发明具有成本低、操作简便，抚仙金线鲃生长良好，成活率达95％以上的优点，能用于大规模生产。
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公开(公告)号：CN101554145B
公开(公告)日：2011-08-24
申请号：CN200910094487.3
申请日：2009-05-22
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
IPC: A01K61/00
CPC classification number: Y02A40/81
Abstract: 本发明涉及一种滇池金线鲃的人工驯养方法，属鱼产品养殖技术领域。滇池金线鲃的人工驯养方法，包括饲料选择和饲料方式，其中：饲料选择：饲料选用浆状食物虾浆、蛋黄浆、挂喂粉状饲料、投喂丰年虫、微粒饲料、大颗粒料人工混合鱼用商品饲料；饲料方式：0-6天刚出膜的滇池金线鲃幼苗长5.5-7.5mm，全靠卵黄囊供给营养，7天后的滇池金线鲃开始摄食浆状食物虾浆和蛋黄浆，20日后摄食丰年虫体并逐渐摄食粉状饲料，70日后摄食微粒饲料，半年后摄食小颗粒料人工混合鱼用商品饲料并逐步摄食大颗粒料人工混合鱼用商品饲料，投食量为体重的2-3％。本发明具有成本低、操作简便，能投入产业化、集约化生产，成活率高的优点。
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公开(公告)号：CN101779605A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN201010114389.4
申请日：2010-02-26
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
CPC classification number: Y02A40/81
Abstract: 本发明涉及一种抚仙金线鲃的人工受精、孵化及驯养方法，属鱼产品养殖技术领域。本发明方法如下：采用湿法受精。将粘附着受精卵的棕片放入50ppm的水霉灵水溶液中消毒20分钟，取出挂在20m2孵化池中进行孵化。水温18-20℃，pH 7.5-8.0，用氧气泵进行增氧，水中溶氧6.5-8.0/L；每隔24小时以同样的方法消毒一次，连续消毒3天，144小时完成孵化。驯养水位保持在1.0-1.2m，水温16-21℃，水中溶氧6.5-8.0/L；用遮光网遮盖池面2/3遮光，并在出水口用40目纱窗网拦截防逃；前7天投喂水生昆虫和水蚯蚓；转食期投喂15天蛋白含量较高的粉状饲料拌上10％鱼粉。定型期投喂粗蛋白含量34％的颗粒饵料。本发明具有成本低、操作简便，抚仙金线鲃生长良好，成活率达95％以上的优点，能用于大规模生产。
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公开(公告)号：CN103436490B
公开(公告)日：2015-10-14
申请号：CN201310400065.0
申请日：2013-09-05
Applicant: 中国科学院昆明动物研究所
Abstract: 本发明涉及一种昆明裂腹鱼鳍细胞系的构建和超低温冷冻保存方法，属淡水水生生物细胞培养和超低温冷冻保存技术领域。该方法是以昆明裂腹鱼腹鳍组织为材料，采用组织块法，在含有胎牛血清和细胞生长因子，pH值为7.0-7.2的DMEM/F12培养液中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养；具体包括制备细胞培养液、原代培养及传代培养步骤。本发明的有益效果在于：1、原代培养耗时短，细胞量大，能用于染色体分析；2、构建的昆明裂腹鱼鳍细胞系形态为成纤维样，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，满足了对昆明裂腹鱼种质资源保存和理论研究及应用的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍细胞系。
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