公开(公告)号：CN113980112B

公开(公告)日：2024-01-26

申请号：CN202111415171.7

申请日：2021-11-25

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 李文辉 ,  张云 ,  高鸽 ,  郑天宇

IPC: C07K14/46 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30的表达载体和表达产物及其构建制备方法，涉及一种可高效表达眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体的构建与表达。眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体由DAMP4载体蛋白，通过linker分别连接眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30N端到C端、C端到N端基因构建PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30、PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30R。通过该表达载体在TSsetta(DE3)Chemically Competent Cell表达感受态细胞中诱导表达可溶性产物和高效纯化可溶性表达产物的方法，从而获得有活性的体外抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R表达产物。该方法实现了抗菌肽OH‑CATH30从N‑C和从C—N的原核表达，实验(56)对比文件Baode Sun et al..Design andproduction of a novel antimicrobialfusion protein in Escherichia coli《.ApplMicrobiol Biotechnol》.2018,第102卷(第20期),摘要，第8764页左栏第3段，第8766页左栏第1段，第8764页右栏第2段-8765页左栏第2段.Ramamourthy Gopal et al..Reversedsequence enhances antimicrobial activityof a synthetic peptide《.J Pept Sci》.2011,第17卷(第5期),摘要.武慧 等.紫花苜蓿的抗菌肽基因Rev4遗传转化《.江苏农业科学》.2017,第45卷(第7期),第44页右栏第2段.Chun-Xia Zhao et al..A simple andlow-cost platform technology forproducing pexiganan antimicrobial peptidein E. coli《.Biotechnol Bioeng》.2015,第957-964页.陈欣欣 等.抗菌肽OH-CATH对大肠杆菌Escherichia coli的作用《.动物学研究》.2009,第171-177页.高鸽.眼镜王蛇cathelicidin抗菌肽的规模表达《.万方数据知识服务平台》.2022,第1页.

公开(公告)号：CN113980112A

公开(公告)日：2022-01-28

申请号：CN202111415171.7

申请日：2021-11-25

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 李文辉 ,  张云 ,  高鸽 ,  郑天宇

IPC: C07K14/46 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30的表达载体和表达产物及其构建制备方法，涉及一种可高效表达眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体的构建与表达。眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体由DAMP4载体蛋白，通过linker分别连接眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30N端到C端、C端到N端基因构建PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30、PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30R。通过该表达载体在TSsetta(DE3)Chemically Competent Cell表达感受态细胞中诱导表达可溶性产物和高效纯化可溶性表达产物的方法，从而获得有活性的体外抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R表达产物。该方法实现了抗菌肽OH‑CATH30从N‑C和从C—N的原核表达，实验流程简单易行，获得的重组抗菌肽在纯化后不经任何处理即具有明显的抑菌活性，经凝血酶酶切之后抑菌活性有了明显的提高。

公开(公告)号：CN101168564B

公开(公告)日：2012-03-21

申请号：CN200710066302.9

申请日：2007-10-22

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 李文辉 ,  张云 ,  赵晖 ,  申吉泓

IPC: C07K14/46 ,  A61K38/17 ,  A61P31/00

Abstract: 本发明涉及人源性抗菌肽及其衍生物的用途，所述人源性抗菌肽具有选自序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，还包括此氨基酸序列多肽中个别氨基酸的取代、环化、L-型氨基酸变为D-型氨基酸、缺失或加入而得到的功能等同物。与其它来源碱性抗菌多肽相比，该人源性抗菌肽具有结构简单、人工合成方便、应用于人体无抗原性的有益特点。本发明的人源性抗菌肽及其衍生物具有显著的抑制细菌以及真菌生长的作用，可以应用于制备抗微生物感染制剂。

公开(公告)号：CN101265296B

公开(公告)日：2011-05-25

申请号：CN200810058260.9

申请日：2008-04-08

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 李文辉 ,  张云 ,  赵晖 ,  金杨 ,  申吉泓

IPC: C07K14/435 ,  C07K7/08 ,  C07K1/04 ,  C12N15/12 ,  A61K38/17 ,  A61K38/10 ,  A61P31/00

Abstract: 本发明提供了来源于爬行动物的爬行动物cathelicidin抗菌肽，所述抗菌肽具有选自序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，本发明还涉及其衍生物以及其应用。爬行动物cathelicidin抗菌肽及其衍生物具有抗细菌和抗真菌性质，尤其是对临床耐药细菌有很好的抑制作用，且具有结构简单、人工合成方便、抗菌谱系广的有益特点。它们可以应用于抗微生物感染制剂的制备，用于人和动物的治疗。

公开(公告)号：CN101186646B

公开(公告)日：2010-06-09

申请号：CN200710066320.7

申请日：2007-10-26

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 李文辉 ,  张云 ,  何英英 ,  刘树柏

IPC: C07K14/81 ,  A61K38/57 ,  A61P1/18 ,  A61P7/04 ,  A61P31/18

Abstract: 本发明涉及眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂及其衍生物，与其它天然来源小分子量蛋白酶抑制剂相比，具有结构简单、基因表达产量高、活性特殊的有益特点。本发明眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂的制备方法可以是从蛇毒粗毒进行分离纯化获得，也可以通过基因工程表达获得。本发明还提供眼镜王蛇毒蛋白酶抑制剂及其衍生物的应用，其具有同时抑制胰蛋白酶以及胰凝乳蛋白酶的双重抑制活性，且对二种蛋白酶的抑制常数基本在同一个数量级，还具有钠通道的抑制活性。

公开(公告)号：CN101230339A

公开(公告)日：2008-07-30

申请号：CN200810058028.5

申请日：2008-01-14

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 张云 ,  刘树柏 ,  何英英 ,  李文辉

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  A61K38/46 ,  A61P35/00 ,  A61P17/02

Abstract: 本发明涉及一种大蹼铃蟾非晶状体βγ－晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物和基因及制法及用途。其天然表观分子量为72kDa，由α亚基和β亚基按αβ2的分子形式以非共价键连接而成，为一类新的ATPase和GTPase酶，具有多种细胞生物活性，在体外纳摩尔水平能够杀死多种肿瘤细胞、抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞脱落和凋亡。在皮摩尔水平具有促进创伤修复的活性。在细胞外经单泛素化修饰，能够直接转运到细胞核中进行基因表达的调控从而调节细胞状态，包括细胞迁移、脱落、生长。本发明的蛋白复合物提供了非晶状体βγ－晶状体蛋白全新的细胞生物学功能及其能够与三叶因子蛋白协同作用的机制，可应用于生物医学试剂制备和抗肿瘤以及促进创伤修复制药。

公开(公告)号：CN1238377C

公开(公告)日：2006-01-25

申请号：CN02113515.0

申请日：2002-03-25

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 张云 ,  赖仞 ,  刘衡 ,  李文辉

IPC: C07K14/435 ,  C12N15/12 ,  A61K38/16 ,  A61P31/00

Abstract: 本发明涉及一种酸性抗菌肽及其应用，属于生物医学领域。酸性抗菌肽，分子量2021.4，等电点4.8，多肽氨基酸全序列一级结构为：Ile Leu Gly Pro Val LeuGly Leu Val Ser Asp Thr Leu Asp Asp Val Leu Gly Ile Leu-AMIDATION。人工化学合成的酸性抗菌肽具有显著的抑制细菌生长的作用，可以作为制备抗微生物感染制剂的应用。

公开(公告)号：CN1170847C

公开(公告)日：2004-10-13

申请号：CN01107255.5

申请日：2001-03-14

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 张云 ,  赖仞 ,  刘衡 ,  李文辉

IPC: C07K14/435 ,  C12N15/11 ,  C12N15/12 ,  A61P31/00 ,  C07H21/00

Abstract: 本发明涉及一种大蹼铃蟾抗微生物肽及其制备方法和其基因，属于生物医学领域。抗微生物肽为从中国两栖类动物大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离得到的一种单链多肽，分子量 2840，等电点9.83，多肽氨基酸全序列一级结构为：NH2-SIGAKILGGVKTFFKGALKELASTYLQ-NH2。制备方法是收集大蹼铃蟾皮肤分泌物，离心去除沉淀、冷冻干燥后，经离子交换、高压液相反相柱层析分离纯化后得到。编码抗微生物肽的基因由663个核苷酸组成，其中编码成熟抗微生物肽为第165-245位核苷酸。抗微生物肽具有广谱和显著的抑制细菌和真菌生长作用。抗微生物肽基因作为基因工程制备抗微生物肽的应用。

公开(公告)号：CN1446824A

公开(公告)日：2003-10-08

申请号：CN02113517.7

申请日：2002-03-25

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 张云 ,  赖仞

IPC: C07K14/435 ,  A61K38/17 ,  A61P9/10

Abstract: 本发明涉及一种血管收缩因子及其制备方法和在制药中的应用，属于生物医学领域。该血管收缩因子是从中国两栖类动物大蹼铃蟾皮肤中分离得到的分子量为65KDa由3条肽链组成的蛋白质，包括2条相同的轻链和1条重链，轻链的分子量为16KDa，重链的分子量为33KDa，等电点6.2，糖含量17－19％。血管收缩因子轻链的N－端20个氨基酸序列结构是：Phe Ser Asp Leu Gln Ile Gly Ser Leu Lys Cys Ala Val Ala Ala Tyr Asp Gln Gly Ala；重链的N－端封闭。其制备方法是收集大蹼铃蟾皮肤匀浆液或者皮肤分泌物，离心去除沉淀、收集上清液冷冻干燥，经离子交换，凝胶过滤纯化即可得到。该血管收缩因子具有强烈收缩血管，诱导血小板聚集的活性，可作为制备心血管疾病治疗药物和诊断试剂的应用。

公开(公告)号：CN1390851A

公开(公告)日：2003-01-15

申请号：CN01108521.5

申请日：2001-06-08

Applicant: 中国科学院昆明动物研究所

Inventor： 张云 ,  赖仞 ,  刘衡 ,  李文辉

IPC: C07K14/435 ,  C07K1/14 ,  C12N15/11 ,  C07H21/00

Abstract: 本发明涉及大蹼铃蟾铃蟾肽及其制备方法和其基因，属于生物医学领域。其铃蟾肽为从中国两栖类动物大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离得到的由16个氨基酸组成的一种单链多肽，分子量1887，等电点10.6，多肽氨基酸全序列一级结构为：pEKKPPRPPQWAVGHFM－NH2。制备方法是收集大蹼铃蟾皮肤分泌物，离心去除沉淀、冷冻干燥后，经凝胶过滤、高压液相反相柱层析分离纯化后即得到。编码大蹼铃蟾铃蟾肽基因核苷酸序列由cDNA由522个核苷酸组成，其中编码成熟大蹼铃蟾铃蟾肽为第173－220位核苷酸。其基因作为基因工程制备铃蟾肽的应用。