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公开(公告)号：CN117625850A
公开(公告)日：2024-03-01
申请号：CN202311664366.4
申请日：2023-12-06
申请人： 海南大学 , 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/94
摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及用于田间快速检测马铃薯Y病毒属的引物、探针及试剂盒。本发明提供了序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的正向引物、反向引物及探针，以及用于检测甘薯马铃薯Y病毒属的试剂盒。本发明以甘薯马铃薯Y病毒属的CP基因为基础，设计特定引物和探针。采用本发明的引物和探针进行检测甘薯马铃薯Y病毒属，仅需以甘薯病叶RNA为模板，进行等温扩增，不需要精密仪器，操作简单，结果可视化，结果可在测流层析试纸条上清晰显示，敏感性高，特异性强，诊断准确，整个检测过程只需25分钟，结果的判定极其简便，适用于甘薯马铃薯Y病毒属的田间快速检测。
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公开(公告)号：CN110951763A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911166008.4
申请日：2019-11-25
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明属于植物基因工程技术领域，公开了一种以番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)为病毒载体的马铃薯Y病毒属病毒基因沉默系统。该系统是将目的基因插入到番木瓜畸形花叶病毒PLDMV的NIb与外壳蛋白CP之间，并在目的基因与CP之间引入NIa-Pro酶切位点。利用Gibson拼接或In-Fusion克隆等体外拼接方法将目的基因片段无缝克隆插入到NIb与CP之间构建成含有植物目的基因的重组病毒沉默载体。该重组病毒沉默载体通过农杆菌注射接种植物，诱导沉默植物的目的基因后观察植物的表型变化。本发明为利用PLDMV沉默载体进行番木瓜的基因功能研究提供了强有力的工具，具有重大的科学意义和应用前景。
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公开(公告)号：CN104911199B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201510355929.0
申请日：2015-06-25
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明涉及一种DNA分子克隆方法，其包括：获得含有ccdB基因的目标载体，所述ccdB基因两端带有SfiI酶切位点、第一接头序列及第二接头序列，所述接头序列为15‑30bp，所述接头序列在SfiI酶切位点外围；获得目标基因，所述目标基因经PCR扩增使其两端同样带有接头序列，其序列与上述第一接头序列和第二接头序列分别一致；将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因，SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应，再经转化大肠杆菌获得重组克隆。通过本发明的方法可将DNA通过一步反应直接克隆到环状的目标载体，不受目标DNA序列限制，并且零背景。
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公开(公告)号：CN116042703A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202211124303.5
申请日：2022-09-15
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明公开了一种植物基因编辑载体及其应用。要点是该植物基因编辑载体在克隆位点处含有NC通用接头1‑SfiI‑ccdB基因‑SfiI‑NC通用接头2的NC克隆框结构，含有1个或多个基因编辑靶序列的基因片段能够通过Nimble cloning(NC克隆)一步连接反应，快速克隆到该载体，进行植物基因编辑研究。本发明提供的载体能简单、快速、高效地克隆植物基因编辑靶序列，方便植物基因编辑研究。
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公开(公告)号：CN113462814A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110557534.4
申请日：2021-05-21
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/94
摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测甘薯金脉病毒的RPA引物和探针、试剂盒及检测方法。本发明以甘薯金脉病毒编码的CP基因特定保守序列为模板，设计特定引物和探针。采用本发明的引物和探针进行检测甘薯金脉病毒，仅需以甘薯病叶DNA为模板，进行等温扩增，不需要精密仪器，操作简单，结果可视化，结果可在侧流层析试纸条上清晰显示，敏感性高，特异性强，诊断准确，整个检测过程只需25分钟，结果的判定极其简便，适用于甘薯金脉病毒的田间快速检测。
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公开(公告)号：CN110863004A
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201911243165.0
申请日：2019-12-06
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及酵母双杂交载体、构建方法及其在蛋白互作中的应用。该酵母双杂交载体包括：pNC-GADT7载体和pNC-GBKT7载体；所述pNC-GADT7载体于pGADT7载体的克隆位点处插入Nimble Cloning克隆框；所述pNC-GBKT7载体于pGBKT7载体的克隆位点处插入Nimble Cloning克隆框。该Nimble Cloning的酵母双杂交载体，以方便目标基因克隆到载体。具有操作简单、克隆效率高、可标准化克隆等优点。
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公开(公告)号：CN105177041B
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201510739878.1
申请日：2015-11-04
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明构建了一套新的用于双分子荧光互补(BiFC)研究的表达载体，载体上整合有荧光蛋白2个片段的表达框架，2个目标蛋白的基因序列能通过一步反应(Golden Gate克隆或闭环Gibson拼接法)同时克隆到载体，分别与荧光蛋白的2个片段融合表达。因此，利用此载体进行BiFC研究时只需构建和向细胞内导入一个载体，极大地方便了植物双分子荧光互补实验的操作。该载体能兼容Golden Gate克隆和闭环Gibson拼接法两种高效的新克隆方法，并且该载体为高拷贝的含T‑DNA序列的植物表达载体，可同时用于植物的瞬时和稳定表达。
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公开(公告)号：CN106399356A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610824257.8
申请日：2016-09-14
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明提供一种病毒侵染性克隆的构建方法及其应用。本发明提供方法包括如下步骤：整个或分段扩增病毒基因组，表达载体线性化处理，基因组两端或各基因片段与表达载体两端分别设计有用于体外拼接的重叠序列；病毒基因组或各基因片段与线性化表达载体进行体外拼接；拼接产物直接转化农杆菌，获得含有病毒侵染性克隆的重组农杆菌。重组农杆菌用于接种，获得病毒的系统性侵染。本发明的创新点在于将病毒基因组与表达载体通过体外核酸拼接后，不转化大肠杆菌，而是转化农杆菌，获得在农杆菌中稳定的病毒侵染性克隆，避免了病毒在大肠杆菌中产生的毒性或不稳定现象，构建方法更为灵活和简便。
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公开(公告)号：CN1596620A
公开(公告)日：2005-03-23
申请号：CN200410055404.7
申请日：2004-07-22
摘要： 本发明涉及番木瓜种苗的组织培养方法，从大面积番木瓜种植区筛选出抗病优质母株，并对其作进一步的抗病性鉴定，再以抗病优质母株之成龄侧芽为外植体，对扩繁增殖条件、繁殖率、正常化成苗、诱导生根等关键技术环节作较为系统的研究，从而建立一套较为完整且适应性好的繁殖体系，解决了以大田成龄番木瓜侧芽为外植体进行组织培养存在的污染率高、增殖率低、诱导生根难和移栽成活率低的关键问题，为番木瓜的生产提供培育优质种苗的技术途径，同时亦为番木瓜的大规模生产开发起到积极的推动作用，这具有十分重要社会和经济效益。
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公开(公告)号：CN106906232B
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN201710222909.5
申请日：2017-04-07
申请人： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
摘要： 本发明公开了一种DNA分子克隆方法及其应用，所述方法包括以下步骤：获得入门载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接XcmI酶切位点、接头序列和SfiI酶切位点；获得表达载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接SfiI酶切位点和接头序列；通过PCR获得目标DNA，通过TA克隆插入到所述入门载体，获得入门克隆；或在PCR过程中通过引物加入相应的接头序列，获得线性PCR产物；将上述入门克隆或线性PCR产物与表达载体混合，在克隆反应液作用下完成克隆。本发明改进了克隆反应液以及入门载体和表达载体的结构，实现单个或多个线性PCR产物或环状质粒上的DNA在克隆反应液作用下直接克隆到环状目标载体的一个或多个部位，提高了克隆效率，可广泛用于各种类型的DNA分子克隆。
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