适用于qRT-PCR法检测TbAP2a基因表达的引物组合、试剂盒和方法

    公开(公告)号:CN108866229A

    公开(公告)日:2018-11-23

    申请号:CN201810845527.2

    申请日:2018-07-27

    Abstract: 本发明公开了一种适用于qRT‑PCR法检测TbAP2a基因转录水平表达的扩增TbAP2a基因组合,包括上游引物和下游引物,上游引物选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7中的至少一种;下游引物选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8中的至少一种。本发明还公开了包含该引物组合的试剂盒以及使用引物组合或试剂盒扩增TbAP2a基因的方法和对TbAP2a基因表达进行定量的方法。本发明的引物组合灵敏度高、特异性强、扩增效率高,且扩增或定量方法能显著降低污染,操作简便,能快速完成扩增或定量,结果判读简单客观,便于分析。

    狼毒不定根的诱导及组织培养的方法

    公开(公告)号:CN102870672A

    公开(公告)日:2013-01-16

    申请号:CN201110193279.6

    申请日:2011-07-12

    Abstract: 本发明涉及一种狼毒(Euphorbia fischeriana)不定根的诱导及组织培养的方法,属于细胞工程技术领域。包括(1)种子的萌发:狼毒种子经HgCl2消毒后置于MS固体培养基上,于光照下萌发;(2)愈伤组织的诱导:将步骤(1)获得的小苗置于含2,4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、6-苄氨基腺嘌呤和椰子汁的MS固体培养基上,于无菌避光条件下诱导形成愈伤组织;(3)不定根的诱导:将步骤(2)获得的愈伤组织置于含吲哚丁酸和椰子汁的MS固体培养基上,于无菌避光条件下诱导形成不定根;(4)不定根的培养:将步骤(3)获得的不定根置于含有吲哚丁酸的MS固体培养基上培养。本发明方法简单、有效物质含量高。

    一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法

    公开(公告)号:CN101781649A

    公开(公告)日:2010-07-21

    申请号:CN200910000836.0

    申请日:2009-01-19

    Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA,miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法,属于基因工程的技术领域,是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA415基因前体(precusor)表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞中,转化获得转基因细胞。HPLC检测结果显示:曼地亚红豆杉转基因细胞系中C-14位氧化紫杉烷的含量发生显著地降低。本方法的优点:高效地降低了曼地亚红豆杉细胞曼地亚红豆杉细胞上述三种C-14位氧化紫杉烷的总含量。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞C-14位氧化紫杉烷的生物合成,可以使代谢流转向紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatinIII)等C-13位氧化紫杉烷(C-13 oxygenated taxoids),为全面提高红豆杉细胞紫杉醇的生物合成产量提供一种新方法。

    一种提高东北红豆杉扦插育苗成活率的方法

    公开(公告)号:CN108834723A

    公开(公告)日:2018-11-20

    申请号:CN201810771799.2

    申请日:2018-07-13

    CPC classification number: A01G17/005 A01G2/10

    Abstract: 本发明公开了一种提高东北红豆杉扦插育苗成活率的方法,它涉及农业种植技术领域。其步骤为:选择插穗,上剪口为平口,下剪口为马蹄形斜面,将插穗在ABT1中浸泡,在穴盘中打孔,然后将插穗插入穴盘中,压实基质,浇透水,并在插床上搭设塑料棚增温保湿,加盖遮阴网,扦插后初期用小喷壶实施叶面喷水并浇水,至产生愈伤组织,大量生根后去除拱棚,并逐步去除遮阴网;移栽定植,将土地进行深耕细翻,施入基肥,并做畦打垄,然后用小土铲挖穴,将穴盘中的幼苗连同基质一起置于穴内,挖穴定植,栽后及时浇透水,并加盖遮阴网。本发明简便易行,育苗成活率高,适用性广,易于推广使用。

    一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法

    公开(公告)号:CN101781650B

    公开(公告)日:2011-12-07

    申请号:CN200910000837.5

    申请日:2009-01-19

    Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA,miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法,属于基因工程的技术领域,是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus xmedia)细胞中。利用优化的转化方法获得了转基因细胞。结果显示:转空载体的对照细胞褐化严重、细胞停止生长,而转水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体的曼地亚红豆杉细胞则不发生褐化,细胞生长正常。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后的褐化现象,解决了曼地亚红豆杉细胞在根癌农杆菌转化后停止生长的难题,为顺利获得曼地亚红豆杉转基因细胞系提供一种新方法。

    一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法

    公开(公告)号:CN101781650A

    公开(公告)日:2010-07-21

    申请号:CN200910000837.5

    申请日:2009-01-19

    Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA,miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法,属于基因工程的技术领域,是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus xmedia)细胞中。利用优化的转化方法获得了转基因细胞。结果显示:转空载体的对照细胞褐化严重、细胞停止生长,而转水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体的曼地亚红豆杉细胞则不发生褐化,细胞生长正常。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后的褐化现象,解决了曼地亚红豆杉细胞在根癌农杆菌转化后停止生长的难题,为顺利获得曼地亚红豆杉转基因细胞系提供一种新方法。

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