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公开(公告)号：CN101781649B
公开(公告)日：2011-12-07
申请号：CN200910000836.0
申请日：2009-01-19
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA415基因前体(precusor)表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞中，转化获得转基因细胞。HPLC检测结果显示：曼地亚红豆杉转基因细胞系中C-14位氧化紫杉烷的含量发生显著地降低。本方法的优点：高效地降低了曼地亚红豆杉细胞曼地亚红豆杉细胞上述三种C-14位氧化紫杉烷的总含量。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞C-14位氧化紫杉烷的生物合成，可以使代谢流转向紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatinIII)等C-13位氧化紫杉烷(C-13oxygenated taxoids)，为全面提高红豆杉细胞紫杉醇的生物合成产量提供一种新方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101781648A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200910000835.6
申请日：2009-01-19
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明涉及一种有效降低曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞合成C-14位氧化紫杉烷(C-14 oxygenated taxoids)的方法，属于基因工程的技术领域，是通过根癌农杆菌介导的双元载体转化系统将针对红豆杉紫杉烷14β羟基化酶基因(简称14OH)片段构建的反义基因表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)培养细胞中。利用优化的转化方法成功地获得了转基因细胞。PCR-Southern杂交、RT-PCR基因表达分析和化学成分检测结果显示：曼地亚红豆杉细胞转基因试验取得成功，转基因细胞系中14OH基因mRNA表达水平发生显著地下降。本发明显著抑制了曼地亚红豆杉细胞向C-14位氧化紫杉烷的流向，有望使代谢流向包括抗癌药物紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatin III)在内的C-13位氧化紫杉烷(C-13oxygenated taxoids)，从而为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新方法。
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公开(公告)号：CN101781647A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200910000834.1
申请日：2009-01-19
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明涉及一种有效降低曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞合成C-14位氧化紫杉烷(C-14 oxygenated taxoids)的方法，属于基因工程的技术领域，是通过根癌农杆菌介导的双元载体转化系统将针对红豆杉紫杉烷14β羟基化酶基因(简称14OH)片段构建的RNA干涉载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)培养细胞中。利用优化的转化方法成功地获得了转基因细胞。PCR-Southern杂交、RT-PCR基因表达分析和化学成分检测结果显示：曼地亚红豆杉细胞转基因试验取得成功，转基因细胞系中14OH基因mRNA表达水平发生显著地下降。本发明显著抑制了曼地亚红豆杉细胞向C-14位氧化紫杉烷的流向，有望使代谢流向包括抗癌药物紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatin III)在内的C-13位氧化紫杉烷(C-13oxygenated taxoids)，从而为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新方法。
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公开(公告)号：CN101781650B
公开(公告)日：2011-12-07
申请号：CN200910000837.5
申请日：2009-01-19
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus xmedia)细胞中。利用优化的转化方法获得了转基因细胞。结果显示：转空载体的对照细胞褐化严重、细胞停止生长，而转水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体的曼地亚红豆杉细胞则不发生褐化，细胞生长正常。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后的褐化现象，解决了曼地亚红豆杉细胞在根癌农杆菌转化后停止生长的难题，为顺利获得曼地亚红豆杉转基因细胞系提供一种新方法。
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公开(公告)号：CN101781650A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200910000837.5
申请日：2009-01-19
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus xmedia)细胞中。利用优化的转化方法获得了转基因细胞。结果显示：转空载体的对照细胞褐化严重、细胞停止生长，而转水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体的曼地亚红豆杉细胞则不发生褐化，细胞生长正常。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后的褐化现象，解决了曼地亚红豆杉细胞在根癌农杆菌转化后停止生长的难题，为顺利获得曼地亚红豆杉转基因细胞系提供一种新方法。
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公开(公告)号：CN101781649A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200910000836.0
申请日：2009-01-19
Applicant: 中国林业科学研究院林业研究所
Abstract: 本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞合成C-14位氧化紫杉烷的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA415基因前体(precusor)表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞中，转化获得转基因细胞。HPLC检测结果显示：曼地亚红豆杉转基因细胞系中C-14位氧化紫杉烷的含量发生显著地降低。本方法的优点：高效地降低了曼地亚红豆杉细胞曼地亚红豆杉细胞上述三种C-14位氧化紫杉烷的总含量。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞C-14位氧化紫杉烷的生物合成，可以使代谢流转向紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatinIII)等C-13位氧化紫杉烷(C-13 oxygenated taxoids)，为全面提高红豆杉细胞紫杉醇的生物合成产量提供一种新方法。
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