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公开(公告)号：CN117757846A
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202311738194.0
申请日：2023-12-18
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/079 , C12N5/10 , C12N7/00 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种树鼩角膜基质永生化细胞系的构建方法，该方法是使用组织块贴壁培养法，从树鼩角膜组织中分离获得原代树鼩角膜基质细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得树鼩角膜基质永生化细胞，并将其应用于单纯疱疹病毒Ⅰ型、登革病毒Ⅱ型、ZIKV以及H1N1病毒的扩增与培养，树鼩角膜基质永生化细胞对这4种病毒敏感，能有效复制并产生较高感染滴度，因此本发明构建的细胞系可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制研究以及病毒的分离培养及相关机制研究，同时也为树鼩角膜基质细胞作为疫苗生产或检定用细胞提供了前期基础数据。
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公开(公告)号：CN109609453A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910117703.5
申请日：2019-02-15
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/0786
摘要： 本发明涉及一种树鼩小胶质细胞培养基与其体外分离培养及纯化的方法，属于生物技术领域。本发明培养基以DMEM/F12完全培养基为基础培养基，并在基础培养基中加入10%胎牛血清、1%双抗、1%MGS和0.04%B27。本发明同时提供一种树鼩小胶质细胞体体外分离培养及纯化的方法，采用上述树鼩小胶质细胞培养基，包括消化脑组织、制备单细胞悬液、混合胶质细胞培养、小胶质细胞分离纯化等步骤，应用本发明树鼩小胶质细胞体外分离培养及纯化的方法可以培养出纯度较高、活力较强的树鼩小胶质细胞，基本可以满足医学、生物学等研究领域对小胶质细胞相关实验研究的要求。
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公开(公告)号：CN109609453B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201910117703.5
申请日：2019-02-15
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/0786
摘要： 本发明涉及一种树鼩小胶质细胞培养基与其体外分离培养及纯化的方法，属于生物技术领域。本发明培养基以DMEM/F12完全培养基为基础培养基，并在基础培养基中加入10%胎牛血清、1%双抗、1%MGS和0.04%B27。本发明同时提供一种树鼩小胶质细胞体体外分离培养及纯化的方法，采用上述树鼩小胶质细胞培养基，包括消化脑组织、制备单细胞悬液、混合胶质细胞培养、小胶质细胞分离纯化等步骤，应用本发明树鼩小胶质细胞体外分离培养及纯化的方法可以培养出纯度较高、活力较强的树鼩小胶质细胞，基本可以满足医学、生物学等研究领域对小胶质细胞相关实验研究的要求。
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公开(公告)号：CN112391346A
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN202011378338.2
申请日：2020-11-30
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/079
摘要： 本发明涉及一种非酶消化法获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方法，属于细胞分离培养技术领域。本发明以gentleMACS全自动组织处理器解离脑组织，消化传代时用TrypLE Express替代常用的胰酶来消化树鼩大脑星形胶质细胞，并含10%胎牛血清、1%双抗DMEM/F12完全培养基进行培养。通过本发明方法可以轻松的实现树鼩大脑星形胶质细胞的体外分离培养，进一步简化了分离方法，缩短周期，减轻细胞伤害，分离效率大大提高，星形胶质细胞特异性标志物‑胶质纤维状酸性蛋白免疫荧光染色率高，能够满足医学、生物学等研究领域对星形胶质细胞相关实验研究的要求。
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公开(公告)号：CN106244549B
公开(公告)日：2019-11-29
申请号：CN201610690263.9
申请日：2016-08-19
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
摘要： 本发明公开一种树鼩角膜内皮细胞的体外分离及纯化方法，经树鼩角膜内皮原代细胞的分离、纯化、CECs的传代培养，得到角膜内皮细胞。分离得到的角膜内皮细胞具有较高的细胞活力，在传至P3代可以实现树鼩角膜内皮细胞的纯化，纯化的细胞具有典型的内皮细胞形态，经NSE免疫荧光鉴定，染色率高。该方法纯化效率大大提高，价格低廉、使用方便，可以获得大量树鼩角膜内皮细胞。实现树鼩角膜内皮细胞的体外培养，填补了目前没有针对树鼩这一物种特定的角膜内皮原代细胞体外培养技术的空白，本发明提供的原代细胞的取材及纯化方法操作简单，价格低廉，体外培养的树鼩角膜内皮细胞可以在长期的传代培养过程中维持良好的细胞形态。
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公开(公告)号：CN103276055B
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201310104794.1
申请日：2013-03-28
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
摘要： 一种以树鼩IL-2质粒为标准品的TAQMAN探针荧光定量PCR方法，包括以树鼩IL-2基因为目标，设计TAQMANPCR引物和探针，设计实验找到最优条件下引物的退火温度、引物浓度、探针浓度，提纯树鼩IL-2质粒计算IL-2基因片段拷贝数，以计算好的树鼩IL-2质粒用10倍梯度稀释，配制拷贝数为105～109copies阳性质粒建立标准曲线，并检测其灵敏性。
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公开(公告)号：CN101692800B
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN200910095042.7
申请日：2009-10-09
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
摘要： 一种野生树鼩实验动物化中的人工繁殖法，包括亲本来源、亲本人工驯养、人工繁殖、怀孕亲本母树鼩的筛选及隔离饲养、新生小树鼩的饲喂以及离乳六个步骤，通过严格控制相关条件，可有效的提高树鼩的繁殖成活率，在生殖季节受孕率可达90％，成活率达到88％以上，使树鼩的人工繁殖达到动物实验化的规模化生产，满足市场要求。
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公开(公告)号：CN101692800A
公开(公告)日：2010-04-14
申请号：CN200910095042.7
申请日：2009-10-09
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
摘要： 一种野生树鼩实验动物化中的人工繁殖法，包括亲本来源、亲本人工驯养、人工繁殖、怀孕亲本母树鼩的筛选及隔离饲养、新生小树鼩的饲喂以及离乳六个步骤，通过严格控制相关条件，可有效的提高树鼩的繁殖成活率，在生殖季节受孕率可达90％，成活率达到88％以上，使树鼩的人工繁殖达到动物实验化的规模化生产，满足市场要求。
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公开(公告)号：CN117343893A
公开(公告)日：2024-01-05
申请号：CN202311437698.9
申请日：2023-11-01
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种原代树鼩主动脉弓平滑肌细胞的分离培养方法，该方法是在获得树鼩主动脉弓段后，将主动脉弓内膜外翻并撕去主动脉弓内膜后，剪切成小块，将组织块转移至带培养基的细胞培养孔板中，每孔放置一个组织块，采用含10‑15% FBS、1%青霉素‑链霉素的DMEM/F‑12培养基培养，传代扩培后，获得原代树鼩主动脉弓平滑肌细胞；本发明方法在取材前执行心脏灌注，最大限度减少血液等成分对原代培养的干扰，采用单个组织块植入细胞培养孔板进行贴壁培养，减少后期纯化难度；使用含10‑15% FBS的DMEM/F‑12培养基，能使细胞快速贴壁和增殖；本发明操作方便，制备成本低，获得的细胞纯度高。
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公开(公告)号：CN115521901B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202211247024.8
申请日：2022-10-12
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/071 , C12N5/10 , C12N15/867 , C12Q1/02
摘要： 本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞；本发明方法获得的细胞能够稳定传代至50代以上，有效维持了树鼩视网膜微血管内皮细胞稳定的生长状态和增殖能力，改善了目前视网膜血管研究只能现用现取的烦琐程序，为眼科相关疾病的研究提供了稳定的视网膜微血管内皮细胞系，真正做到省时、省力、高效、便利。
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