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公开(公告)号：CN117757846A
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202311738194.0
申请日：2023-12-18
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/079 , C12N5/10 , C12N7/00 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种树鼩角膜基质永生化细胞系的构建方法，该方法是使用组织块贴壁培养法，从树鼩角膜组织中分离获得原代树鼩角膜基质细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得树鼩角膜基质永生化细胞，并将其应用于单纯疱疹病毒Ⅰ型、登革病毒Ⅱ型、ZIKV以及H1N1病毒的扩增与培养，树鼩角膜基质永生化细胞对这4种病毒敏感，能有效复制并产生较高感染滴度，因此本发明构建的细胞系可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制研究以及病毒的分离培养及相关机制研究，同时也为树鼩角膜基质细胞作为疫苗生产或检定用细胞提供了前期基础数据。
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公开(公告)号：CN109609453A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910117703.5
申请日：2019-02-15
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/0786
摘要： 本发明涉及一种树鼩小胶质细胞培养基与其体外分离培养及纯化的方法，属于生物技术领域。本发明培养基以DMEM/F12完全培养基为基础培养基，并在基础培养基中加入10%胎牛血清、1%双抗、1%MGS和0.04%B27。本发明同时提供一种树鼩小胶质细胞体体外分离培养及纯化的方法，采用上述树鼩小胶质细胞培养基，包括消化脑组织、制备单细胞悬液、混合胶质细胞培养、小胶质细胞分离纯化等步骤，应用本发明树鼩小胶质细胞体外分离培养及纯化的方法可以培养出纯度较高、活力较强的树鼩小胶质细胞，基本可以满足医学、生物学等研究领域对小胶质细胞相关实验研究的要求。
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公开(公告)号：CN117343893A
公开(公告)日：2024-01-05
申请号：CN202311437698.9
申请日：2023-11-01
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种原代树鼩主动脉弓平滑肌细胞的分离培养方法，该方法是在获得树鼩主动脉弓段后，将主动脉弓内膜外翻并撕去主动脉弓内膜后，剪切成小块，将组织块转移至带培养基的细胞培养孔板中，每孔放置一个组织块，采用含10‑15% FBS、1%青霉素‑链霉素的DMEM/F‑12培养基培养，传代扩培后，获得原代树鼩主动脉弓平滑肌细胞；本发明方法在取材前执行心脏灌注，最大限度减少血液等成分对原代培养的干扰，采用单个组织块植入细胞培养孔板进行贴壁培养，减少后期纯化难度；使用含10‑15% FBS的DMEM/F‑12培养基，能使细胞快速贴壁和增殖；本发明操作方便，制备成本低，获得的细胞纯度高。
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公开(公告)号：CN115521901B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202211247024.8
申请日：2022-10-12
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/071 , C12N5/10 , C12N15/867 , C12Q1/02
摘要： 本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞；本发明方法获得的细胞能够稳定传代至50代以上，有效维持了树鼩视网膜微血管内皮细胞稳定的生长状态和增殖能力，改善了目前视网膜血管研究只能现用现取的烦琐程序，为眼科相关疾病的研究提供了稳定的视网膜微血管内皮细胞系，真正做到省时、省力、高效、便利。
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公开(公告)号：CN115136928B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202210785467.6
申请日：2022-07-05
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： A01K67/02 , A23K20/158 , A23K20/163 , A23K20/168 , A23K50/00
摘要： 本发明涉及一种树鼩Ⅱ型糖尿病快速的造模方法，该方法是选用树鼩，采用高脂高糖饲料喂养12‑15天，自由取食，自由饮水；在喂养第7‑9天时，利用链脲佐菌素对树鼩给药，剂量为90‑110mg/kg；所述的高脂高糖饲料包括按照重量份数计的如下组分：基础饲料68‑70份、猪油9‑11份、白糖9‑11份、果糖9‑11份、胆固醇0.9‑1.2份。本方法可使树鼩表现为持续性高血糖，空腹血糖≥11.1mmol/L，尿糖++++，可作为研究糖尿病及其并发症发病机制以及药物作用机理的模型。并且本方法具有周期短、造模方法简单、死亡率低等优点，而且能模仿Ⅱ型糖尿病的发病经过，表型接近人类Ⅱ型糖尿病，易于推广应用。
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公开(公告)号：CN115786237A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211322803.X
申请日：2022-10-27
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种自发永生化树鼩脑微血管内皮细胞系的建立方法，该方法通过树鼩大脑皮层的分离、树鼩脑微血管段的富集、树鼩脑微血管段的消化分离、树鼩脑微血管内皮细胞的培养、树鼩脑微血管内皮细胞的初步纯化培养、树鼩脑微血管内皮细胞的嘌呤霉素纯化培养、可连续传代树鼩脑微血管内皮细胞的筛选等步骤获得可连续传代120代以上的树鼩脑微血管内皮细胞，且细胞保持稳定的细胞活力和均一的细胞形态，本发明方法没有端粒酶或者SV40等外源基因的引入，避免了转化细胞引起特性改变或者恶化的风险，为体外研究脑微血管内皮细胞相关疾病提供了理想的实验材料。
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公开(公告)号：CN115521901A
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202211247024.8
申请日：2022-10-12
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/071 , C12N5/10 , C12N15/867 , C12Q1/02
摘要： 本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞；本发明方法获得的细胞能够稳定传代至50代以上，有效维持了树鼩视网膜微血管内皮细胞稳定的生长状态和增殖能力，改善了目前视网膜血管研究只能现用现取的烦琐程序，为眼科相关疾病的研究提供了稳定的视网膜微血管内皮细胞系，真正做到省时、省力、高效、便利。
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公开(公告)号：CN115404219A
公开(公告)日：2022-11-29
申请号：CN202211102684.7
申请日：2022-09-09
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/079
摘要： 本发明公开了一种树鼩视网膜神经节细胞的分离培养方法，该方法是采用酶消化法从树鼩视网膜组织中分离获得原代树鼩视网膜神经节细胞，方法实施过程中胰蛋白酶液的浓度为0.25%，细胞培养使用的培养基为含有5‑15ng/mLbFGF的CR培养基；本发明方法可以轻松实现树鼩视网膜神经节细胞的体外分离培养，进一步简化了分离方法，神经节细胞特异性标志物Brn‑3a免疫荧光染色率高，能够满足生物学研究领域对视网膜神经节相关实验的要求。
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公开(公告)号：CN109680000B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201811555412.6
申请日：2018-12-18
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10 , C12Q1/02
摘要： 本发明涉及一种利用树鼩骨髓间充干细胞建立HCV细胞模型的方法，属于生物医药技术领域。该方法先采用OCLN慢病毒载体对树鼩骨髓间充干细胞进行感染，然后，加入CD81慢病毒载体继续进行感染，接着，再加入miR‑122慢病毒载体进行感染，感染4h之后，再加入体积是当前培养基体积1/2的含4μg/mL polybrene的新鲜培养基，第二天，去除旧的培养基，换上新鲜培养基继续培养，得到HCV细胞模型，该细胞具有骨髓间充质干细胞的基本特性和分化潜能，并对HCV易感，支持HCV入胞、复制和产出具有感染性的病毒颗粒，为研究HCV的致病机制及药物筛选提供了新的细胞模型资源。
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公开(公告)号：CN108486156B
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN201810037266.1
申请日：2018-01-15
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10 , C12Q1/02
摘要： 本发明涉及一种永生化树鼩小肠上皮细胞系及其构建方法与应用，属于细胞技术领域。本发明通过用慢病毒介导hTERT基因转染获得的细胞系，激活了树鼩肠上皮细胞的端粒酶活性，能够迅速、有效的建立永生化的树鼩肠上皮细胞，所建立的永生化树鼩肠上皮细胞成功越过了复制衰老，获得了永生性，并且该永生化树鼩肠上皮细胞保持了与原代树鼩肠上皮细胞十分相近的表型，保持了细胞接触抑制和细胞增殖的密度限制，用呼肠孤病毒感染以后能够出现CPE，所以能够用于病毒感染等研究。
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