马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN102242082B

    公开(公告)日:2012-10-24

    申请号:CN201110105382.0

    申请日:2011-04-26

    Abstract: 本发明公开了马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,细胞融合后通过有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得两株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11和3E10。两株单抗均能产生较高的腹水效价,Western-blot分析表明,所获得的2株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白;间接免疫荧光试验证明,2株单抗能够与天然EIV结合;ELISA测定,2株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。本发明为抗EIV NP单抗的制备及后期EIV检测方法的建立提供了物质基础。

    重组马流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗

    公开(公告)号:CN103602638A

    公开(公告)日:2014-02-26

    申请号:CN201310589569.1

    申请日:2013-11-20

    Abstract: 本发明公开了一种重组马流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗。该重组马流感病毒包含:马流感病毒A/equine/xinjiang/3/07(H3N8)株的HA和NA基因,以及流感病毒A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)(A/PR/8/34(H1N1,简称PR8病毒)的PB2、PB1、PA、NP、M和NS六个内部基因。本发明的一种马流感重组病毒毒株、命名为rH3N8-PR,该毒株的保藏号为CGMCC NO.8161。本发明还公开了该马流感重组病毒的制备方法以及由其制得的疫苗。与亲本株相比,本发明的马流感重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均能产生很高的病毒滴度和血凝效价,而且对小鼠的致病性显著降低,实验结果表明由本发明的马流感重组病毒制得的疫苗具有良好的免疫原性和保护效力。

    用于诊断马流感病毒和鉴定其亚型的多重RT-PCR引物及其应用

    公开(公告)号:CN101328508B

    公开(公告)日:2010-08-18

    申请号:CN200810132409.3

    申请日:2008-07-15

    Abstract: 本发明公开了一种诊断马流感病毒(EIV)和鉴定其亚型的多重RT-PCR方法,包括:以待检样品RNA为模板,以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4两组核苷酸序列为多重引物进行RT-PCR反应;如果从样品中只扩增出了227bp的产物,则该样品为EIV的H7N7亚型;如果同时扩增出了227bp和595bp的产物,则该样品为EIV的H3N8亚型;如果未扩增出227bp的产物,则该样品不含有EIV。本发明根据RT-PCR技术原理,根据EIV只有两种HA亚型的特点,建立了多重Rt-PCR检测方法,其敏感性强、特异性高,可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。

    区分马传染性贫血中国弱毒疫苗株与美洲流行毒株的方法

    公开(公告)号:CN101665841A

    公开(公告)日:2010-03-10

    申请号:CN200810214354.0

    申请日:2008-09-05

    Abstract: 本发明公开了一种区分马传染性贫血中国弱毒疫苗株与美洲流行毒株的方法,包括:(1)从感染了待检测毒株的马外周血白细胞中提取DNA;(2)以该DNA为模板,以P1/P3为引物进行第一轮PCR扩增;(2)以P2/P3为引物进行第二轮PCR扩增;(3)PCR产物进行双酶切分析;如果酶切出了340bp,190bp和150bp片段,则该检测毒株为美洲流行毒株;如果仅切出了340bp片段,则该检测毒株为中国弱毒疫苗株。本发明方法可以对阿根廷代表毒株感染马和中国疫苗免疫马进行准确的区分,可以灵敏特异的检测感染马传贫病毒的马匹,能够鉴别到0.2ng细胞染色体DNA中的病毒特异性DNA片段,而且只用5-7小时就可以快速的进行区分。

    一种H3N8亚型马流感重组病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN103898070A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410076834.0

    申请日:2014-03-04

    Abstract: 本发明公开了一种H3N8亚型马流感重组病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用。本发明的疫苗中含有由SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所述核苷酸序列用昆虫/杆状病毒表达系统表达后所得的重组病毒样颗粒蛋白和药物学上可接受的载体、佐剂或赋形剂。本发明的重组病毒样颗粒与天然病毒粒子的形态结构类似,具有良好的免疫原性,由其制备得到的疫苗免疫小鼠后能够诱导小鼠产生良好的保护性免疫反应,且没有活病毒的任何危险,同时还能够区分自然感染者和免疫者,不干扰流行病学调查,因此,本发明的一种H3N8亚型马流感病毒样颗粒疫苗可以作为预防和治疗马流感的候选疫苗。

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