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公开(公告)号：CN102978202A
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201210383179.4
申请日：2012-10-10
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 , 扬州大学
Abstract: 本发明为一种猪骨骼肌中特异过表达猪内源IGF1(C1：Ea)基因的安全型表达载体。该载体包含猪内源性序列sk-α-actinPromoter/IGF1(C1:Ea)/sk-α-actin3’UTR/SV40增强子串联组成的表达盒。本发明的表达载体在细胞水平上验证了骨骼肌特异sk-α-actin启动子在成肌细胞中能高效表达，在具有成肌分化潜能的PEF细胞中仅低水平表达而在其他类型细胞中不表达。本发明中构建的载体制备转基因小鼠，通过定量PCR和WesternBlot检测出转基因小鼠骨骼肌中IGF1基因的mRNA和蛋白表达水平分别为野生型小鼠的15倍和3.5倍，并且仅在骨骼肌中高效表达。
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公开(公告)号：CN101792766B
公开(公告)日：2012-06-06
申请号：CN201010033947.4
申请日：2010-01-07
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段。该DNA片段，是如下1)或2)：1)其核苷酸序列如序列表中序列3的自5’端6-1108位所示；2)其核苷酸序列如序列表中序列3所示。含有上述DNA片段的重组载体也属于本发明的保护范围之内。具体地，上述重组载体是将上述的DNA片段插入pcDNA3.1(+)的多克隆位点构成的重组表达载体。含有上述DNA片段的转基因细胞系也属于本发明的保护范围之内。上述转基因细胞培养后，pcDNA-GH12组GH表达量是转pcDNA质粒对照组的16410倍；pcDNA-GH12组的GH与内参beta-actin比值为0.278，显著高于正常对照组(转pcDNA空载体组)的0.016。说明含有第1，2内含子的情况下，GH的表达量更高。
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公开(公告)号：CN101892256B
公开(公告)日：2012-05-09
申请号：CN201010102427.4
申请日：2010-01-27
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/63 , C12N5/10 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/8509 , A01K67/0275 , A01K2227/108 , A01K2267/01 , A01K2267/02 , C07K14/61
Abstract: 本发明公开了一种培育猪生长激素表达量增强的转基因动物的方法。本发明还公开了培育转基因胚胎的方法，是将如下1)或2)的重组表达载体导入目的胚胎中，得到猪生长激素表达量高于所述目的胚胎的转基因胚胎：1)TRE-GH和TET-ON；2)TRE-GH-TET-ON，其中TRE-GH是将序列表中序列2所示的DNA片段插入TRE载体的多克隆位点构成的重组表达载体，所述TRE载体是将序列表中序列1所示的DNA片段插入pUC19质粒的多克隆位点构成的重组载体；TRE-GH-TET-ON是将Nhel和HindIII双酶切TET-ON得到2.5Kb大小的片段与Nhel和HindIII双酶切TRE-GH得到的3.3KB大小的片段连接，得到的重组表达载体。将该胚胎移植至动物中即可获得转基因动物。实验证明加DOX后转基因猪血液内GH急剧增加。
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公开(公告)号：CN101851637B
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201010034318.3
申请日：2010-01-15
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85 , A61D19/04 , A01K67/027
CPC classification number: C12N9/16 , A01K67/0275 , A01K2217/052 , A01K2227/108 , A01K2267/02 , C07K14/435
Abstract: 本发明公开了一种制备同时表达多个基因的转基因动物的方法。本发明还公开了一种制备转基因胚胎的方法，上述制备转基因胚胎的方法，是将植酸酶基因和人粘病毒抗性基因A均导入目的胚胎中，得到转基因胚胎。将转基因胚胎移植到雌性的目的动物的体内，即可得到表达多个基因的转基因动物。本发明的显著优势表现在一次转基因实现多基因的同时表达，为制备转联合基因动物等提供一种便捷的手段。
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公开(公告)号：CN104561094A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201410843141.X
申请日：2014-12-30
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种无选择标记基因的成纤维细胞阳性单克隆的制备方法。包括如下步骤：(1)将外源基因连入骨架载体中，得到重组载体；所述骨架载体只含有一个选择标记基因；(2)用所述限制性内切酶A酶切所述重组载体，得到线性化重组载体；酶切时使所述重组载体中的选择标记基因无法表达；(3)将所述线性化重组载体转化出发成纤维细胞，得到转化后的成纤维细胞；(4)将所述转化后的成纤维细胞进行梯度稀释，培养并鉴定后得到成纤维细胞阳性单克隆。实验证明：通过本发明的方法可获得稳定转入目的片段的无选择标记基因的成纤维细胞阳性单克隆，为今后以原代成纤维细胞作为转染受体、筛选无选择标记基因阳性克隆的实验提供了研究基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101608189B
公开(公告)日：2011-01-05
申请号：CN200910089428.7
申请日：2009-07-17
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种表达双基因的真核表达载体。该载体，其序列其序列含有植酸酶基因表达盒和人粘病毒抗性基因1表达盒。本发明的表达载体在细胞水平上验证了含双基因的表达载体的表达效率几乎和两单基因组表达效率相当。本发明的含双基因的AMP质粒转染猪PK15细胞及制备转基因小鼠，通过定量PCR检测出AMP的表达双基因(植酸酶基因(appA)和人粘病毒抗性基因1(Mx1))的效率几乎和两单基因组表达效率相当。
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公开(公告)号：CN101608189A
公开(公告)日：2009-12-23
申请号：CN200910089428.7
申请日：2009-07-17
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种表达双基因的真核表达载体。该载体，其序列其序列含有植酸酶基因表达盒和人粘病毒抗性基因1表达盒。本发明的表达载体在细胞水平上验证了含双基因的表达载体的表达效率几乎和两单基因组表达效率相当。本发明的含双基因的AMP质粒转染猪PK15细胞及制备转基因小鼠，通过定量PCR检测出AMP的表达双基因(植酸酶基因(appA)和人粘病毒抗性基因1(Mx1))的效率几乎和两单基因组表达效率相当。
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公开(公告)号：CN101851637A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN201010034318.3
申请日：2010-01-15
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85 , A61D19/04 , A01K67/027
CPC classification number: C12N9/16 , A01K67/0275 , A01K2217/052 , A01K2227/108 , A01K2267/02 , C07K14/435
Abstract: 本发明公开了一种制备同时表达多个基因的转基因动物的方法。本发明还公开了一种制备转基因胚胎的方法，上述制备转基因胚胎的方法，是将植酸酶基因和人粘病毒抗性基因A均导入目的胚胎中，得到转基因胚胎。将转基因胚胎移植到雌性的目的动物的体内，即可得到表达多个基因的转基因动物。本发明的显著优势表现在一次转基因实现多基因的同时表达，为制备转联合基因动物等提供一种便捷的手段。
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公开(公告)号：CN101792766A
公开(公告)日：2010-08-04
申请号：CN201010033947.4
申请日：2010-01-07
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段。该DNA片段，是如下1)或2)：1)其核苷酸序列如序列表中序列3的自5’端6-1108位所示；2)其核苷酸序列如序列表中序列3所示。含有上述DNA片段的重组载体也属于本发明的保护范围之内。具体地，上述重组载体是将上述的DNA片段插入pcDNA3.1(+)的多克隆位点构成的重组表达载体。含有上述DNA片段的转基因细胞系也属于本发明的保护范围之内。上述转基因细胞培养后，pcDNA-GH12组GH表达量是转pcDNA质粒对照组的16410倍；pcDNA-GH12组的GH与内参beta-actin比值为0.278，显著高于正常对照组(转pcDNA空载体组)的0.016。说明含有第1，2内含子的情况下，GH的表达量更高。
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公开(公告)号：CN101775370A
公开(公告)日：2010-07-14
申请号：CN201010034202.X
申请日：2010-01-13
Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/10 , C12N15/55 , C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明的目的在于提供一种培育转基因动物的方法。本发明还提供一种培育转基因胚胎的方法，该培育转基因胚胎的方法，是将植酸酶基因导入目的胚胎中，得到转基因胚胎。将上述的转基因胚胎移植到假孕雌性动物的体内，得到转基因动物。本发明的转基因胚胎能表达appA基因，本发明培育的转基因动物能表达植酸酶的活性，具有可以水解植酸及其盐，释放出动物可利用的磷，使提高磷的利用率，降低粪磷含量。
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