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公开(公告)号：CN116694469A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310652682.3
申请日：2023-06-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种单个球虫的分离方法，属于生物技术领域。一种单个球虫的分离方法将荧光蛋白基因和靶标基因形成的融合基因整合至球虫子孢子基因组中，将整合的子孢子进行药物筛选；采用CellCut激光显微切割操作系统对筛选后的卵囊进行单卵囊分选，培养，得到单个球虫。本发明提供的方法具有单卵囊分离效率及准确率高的优点，同时由于本发明基于荧光标记使靶标蛋白可视化的原理，使制备的单球虫符合高内涵筛选平台的基本要求，为筛选靶定基因的抑制剂或者激动剂的高通量筛选奠定了坚实的基础。本模型可应用于球虫药物的筛选，具有的假阳性低、筛选所需样本少、筛选样本量大、易于标准化、筛选速度快、特异性强等优势。
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公开(公告)号：CN111154653B
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010047335.4
申请日：2020-01-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N1/10 , C12N1/02 , A01K67/033 , C12R1/90
Abstract: 本发明涉及一种碘克沙醇密度梯度离心纯化虫卵的方法，属于虫卵纯化技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)将含虫卵样品进行破碎和均质；2)将匀浆与次氯酸钠水溶液混合进行消化，过筛，得到滤液；3)将滤液进行离心，得到的沉淀用饱和食盐水进行悬浮，离心，得到上清液；4)将上清液与水混合，离心，得到第一沉淀；5)将第一沉淀和次氯酸钠水溶液混合，在冰上放置，离心，得到第二沉淀；6)将第二沉淀溶于TE缓冲液中，得到TE虫卵悬浮液，进行碘克沙醇密度梯度离心，得到纯化虫卵。本发明所述方法能够从粪便和盲肠内容物中纯化出高纯度虫卵，这些高纯度虫卵可进一步用于体外培养、疫苗研发和分子生化研究。
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公开(公告)号：CN103131719B
公开(公告)日：2014-06-04
申请号：CN201310043128.1
申请日：2013-02-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及脑多头带绦虫免疫保护性抗原烯醇酶TmENO重组蛋白及其制备方法及应用。本发明的重组蛋白其氨基酸序列是GenBank登录号JQ627651的ORF序列编码的氨基酸序列SEQNo.5，其编码基因序列按大肠杆菌偏爱密码子进行优化后的基因序列为SEQNo.6。重组蛋白能明显减少寄生在绵羊绵羊大脑中的包囊数，说明具有免疫保护性。相关实验表明，本发明的重组蛋白免疫动物后可产生高滴度的抗体，并对脑多头带绦虫虫卵攻击感染产生较强的免疫保护性。本发明的TmENO重组蛋白是脑多头蚴病疫苗研制的候选靶标，可以用于脑多头蚴病的免疫预防。
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公开(公告)号：CN112553079A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011502338.9
申请日：2020-12-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 曲自刚
Abstract: 本发明提供了一种表达外源荧光蛋白球虫的构建方法，属于基因工程技术领域。表达外源荧光蛋白球虫的构建方法，针对球虫的目的基因设计gRNA，构建含gRNA的基因编辑质粒；构建含目标基因和mCherry基因的同源重组质粒；将基因编辑质粒和同源重组质粒共同转染球虫的子孢子；将转染后的子孢子感染动物，筛选，得到表达外源荧光蛋白球虫。本发明利用基因编辑技术和同源重组技术相结合在球虫基因组中敲入荧光蛋白mCherry基因和筛选基因，构建的球虫能稳定高效表达荧光信号。所述构建方法不仅能成功构建表达有外源荧光蛋白球虫而且荧光蛋白表达稳定且效率高，适用于球虫的生长、基因工程或药物筛选方面的研究。
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公开(公告)号：CN111154653A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010047335.4
申请日：2020-01-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N1/10 , C12N1/02 , A01K67/033 , C12R1/90
Abstract: 本发明涉及一种碘克沙醇密度梯度离心纯化虫卵的方法，属于虫卵纯化技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)将含虫卵样品进行破碎和均质；2)将匀浆与次氯酸钠水溶液混合进行消化，过筛，得到滤液；3)将滤液进行离心，得到的沉淀用饱和食盐水进行悬浮，离心，得到上清液；4)将上清液与水混合，离心，得到第一沉淀；5)将第一沉淀和次氯酸钠水溶液混合，在冰上放置，离心，得到第二沉淀；6)将第二沉淀溶于TE缓冲液中，得到TE虫卵悬浮液，进行碘克沙醇密度梯度离心，得到纯化虫卵。本发明所述方法能够从粪便和盲肠内容物中纯化出高纯度虫卵，这些高纯度虫卵可进一步用于体外培养、疫苗研发和分子生化研究。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103243105B
公开(公告)日：2018-11-02
申请号：CN201310184056.2
申请日：2013-05-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种重组蛋白的制备方法，特别是一种TsSerpin重组蛋白，以及这种蛋白和它的用途。本发明的TsSerpin重组蛋白的制备方法是：以猪旋毛虫肌幼虫中提取总RNA为模板，以Oligo(dT)18 Primer为引物进行反转录；再用上述所得到的反转录cDNA为模板，用SEQ ID №1和SEQ ID №2为引物进行PCR扩增，得到猪旋毛虫TsSerpin基因；再经构建重组质粒、转化大肠杆菌等处理得到目标蛋白。本发明的重组蛋白可用于制备检测旋毛虫病的抗原。
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公开(公告)号：CN103243105A
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201310184056.2
申请日：2013-05-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种重组蛋白的制备方法，特别是一种TsSerpin重组蛋白，以及这种蛋白和它的用途。本发明的TsSerpin重组蛋白的制备方法是：以猪旋毛虫肌幼虫中提取总RNA为模板，以Oligo(dT)18Primer为引物进行反转录；再用上述所得到的反转录cDNA为模板，用SEQID№1和SEQID№2为引物进行PCR扩增，得到猪旋毛虫TsSerpin基因；再经构建重组质粒、转化大肠杆菌等处理得到目标蛋白。本发明的重组蛋白可用于制备检测旋毛虫病的抗原。
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公开(公告)号：CN116694473A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310649380.0
申请日：2023-06-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种辅助完成球虫子孢子发育循环的方法,属于生物技术领域。本发明将子孢子通过胶囊的方式进入动物体内，避免机械破坏和胃液消化，通过采用肠溶壳空囊将子孢子纳于其中，到达肠道后再肠道消化酶的作用下将肠溶壳溶解，使子孢子释放出来从而达到感染肠道的目的。本发明为球虫材料的获得提供了一种快速简便的制备方法，具有广泛适用性。
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公开(公告)号：CN114588137A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210284583.X
申请日：2022-03-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K31/085 , A61P33/00
Abstract: 本发明提供了一种三氯生在制备杀灭寄生线虫药物中的应用，属于药物化学技术领域，在本发明中，三氯生对旋毛虫各时期均具有明显的致死作用，且用量低，安全性高，三氯生可作为治疗线虫病的候选分子之一，对开发新杀灭线虫药物有重要的参考价值。
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公开(公告)号：CN114058511A
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202111443071.5
申请日：2021-11-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N1/10
Abstract: 本发明提供了一种利用DNA探针分离球虫小配子的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种利用DNA探针分离球虫小配子的方法，从感染球虫卵囊的动物盲肠中分离盲肠黏膜组织，去除杂质，得到球虫细胞；用DNA探针对所述球虫细胞进行染色，将染色后的球虫细胞用流式细胞仪分选，去除死细胞和杂质，收集单倍体细胞为球虫小配子。本发明提供的方法为研究球虫小配子的蛋白质组学和转录组学以及在药物研发中的应用奠定了基础。
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