公开(公告)号：CN118685385A

公开(公告)日：2024-09-24

申请号：CN202410780524.0

申请日：2024-06-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 梁志宏 ,  张真真 ,  张昊祥 ,  赵自通

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  A23K10/14 ,  C12H1/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及酶工程技术领域，具体涉及一种酸稳定性和可溶表达量提高的羧肽酶A突变体。本发明通过计算机辅助设计，对现有牛胰腺羧肽酶A的氨基酸序列(PDB ID：1M4L)进行分子改造，获得突变体L203H。本发明制备的突变体L203H具有OTA降解活性，72h内在pH 6.0下对1μg/mL的OTA降解率为98.76％。与现有野生型羧肽酶A相比，该突变体的最适pH从8.0降到6.0，可溶表达量从5.25mg/mL提高到16.56mg/mL，有效地提高了其酸稳定性和可溶表达量，在食品/农产品以及饲料的脱毒领域中具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN116286687A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202111485806.0

申请日：2021-12-07

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 梁志宏 ,  彭梦雪 ,  张真真 ,  徐新格

IPC: C12N9/00 ,  C12N1/20 ,  A23L5/20 ,  G01N30/90 ,  G01N30/94 ,  G01N30/95 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于农业生物技术领域，公开了一种赭曲霉毒素降解酶的分离纯化方法，包含以下步骤：生产菌株发酵培养，获得胞外上清液；胞外上清液经硫酸铵盐析获得粗酶液；疏水柱层析获得赭曲霉毒素降解活性组分；高分辨活性电泳切胶回收，获得赭曲霉毒素降解酶组分；质谱鉴定赭曲霉毒素降解酶。本发明的方法将硫酸铵盐析、疏水层析和高分辨活性电泳切胶纯化串联，减少纯化的流程和时间，简化样品处理过程。利用本发明公布的方法，鉴定获得4个具有赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素B降解功能的酶，降解率达100％。本发明纯化的赭曲霉毒素降解活性组分，可应用于赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素B的降解，为食品、饲料和农业等领域的赭曲霉毒素污染控制提供基础。

公开(公告)号：CN116240180A

公开(公告)日：2023-06-09

申请号：CN202111486582.5

申请日：2021-12-07

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 梁志宏 ,  彭梦雪 ,  张真真 ,  张昊祥

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于农业生物技术领域，涉及赭曲霉毒素A(OTA)和赭曲霉毒素B(OTB)降解酶BnOTase4及其编码基因和应用。本发明提供降解酶BnOTase4，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；提供编码上述降解酶的基因，其碱基序列如SEQ ID NO.2所示；还提供上述降解酶在降解OTA和OTB中的应用。BnOTase4降解酶具有OTA和OTB的降解活性，降解率达100％。在37℃，pH7.4的降解体系中，分别以OTA和OTB为底物测定的米氏常数Km为1.09和0.64μmol/L。本发明的降解酶BnOTase4可应用于食品、饲料和农业等领域，减少赭曲霉毒素对人类和动物的健康危害。