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公开(公告)号:CN110819707A
公开(公告)日:2020-02-21
申请号:CN201911160967.5
申请日:2019-11-24
申请人: 中南大学湘雅医院
IPC分类号: C12Q1/6869 , C12Q1/6897 , C12N15/867 , C12N15/65
摘要: 本发明公开了一种针对多种来源细胞样本中内部核糖体结合位点(IRES)元件的高通量鉴定方法。利用针对mRNA链5’-端帽子结构及3’-端多聚腺苷酸尾巴设计的寡聚核苷酸通过逆转录从样本中获取全长的cDNA文库,利用TN5转座酶及所设计含特殊接头序列的核酸片段使cDNA文库片段化,利用含有红色荧光蛋白及绿色荧光蛋白及特殊元件的慢病毒报告基因质粒载体来筛选具有活性的IRES元件并排除翻译过程中造成的假阳性结果,利用长读长测序技术对活性IRES元件进行鉴定并排除转录过程中启动子及可变剪切造成的假阳性结果。所述方法将IRES元件的高通量鉴定推向临床应用,从而可对疾病发生发展过程中IRES元件所扮演的角色进行深入研究。
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公开(公告)号:CN112086127B
公开(公告)日:2023-03-10
申请号:CN202010979785.7
申请日:2020-09-17
申请人: 中南大学湘雅医院
摘要: 本发明公开的一种针对群体重要功能突变比较遗传变异差异的方法,利用预测软件或实际功能验证试验对突变功能的评估获得功能突变的集合后给予这些功能突变更高的权重值,利用二代测序技术或基因分型技术如SNP芯片获取某群体中各个个体的基因型信息后计算群体某多态性位点的基因频率,利用本方法所述的计算公式可批量计算以基因为单位的遗传多态性在不同人群之间的差异程度。所述方法将遗传单元从单个多态性位点上升到单个基因,从而可以比较某基因的全部功能突变在不同群体间的差异程度,以预测某些基因相关表型在不同群体间的差异及指导基因相关遗传研究在不同群体间的开展。
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公开(公告)号:CN112086127A
公开(公告)日:2020-12-15
申请号:CN202010979785.7
申请日:2020-09-17
申请人: 中南大学湘雅医院
摘要: 本发明公开的一种针对群体重要功能突变比较遗传变异差异的方法,利用预测软件或实际功能验证试验对突变功能的评估获得功能突变的集合后给予这些功能突变更高的权重值,利用二代测序技术或基因分型技术如SNP芯片获取某群体中各个个体的基因型信息后计算群体某多态性位点的基因频率,利用本方法所述的计算公式可批量计算以基因为单位的遗传多态性在种族之间的差异程度。所述方法将遗传单元从单个多态性位点上升到单个基因,从而可以比较某基因的全部功能突变在不同群体间的差异程度,以预测某些基因相关表型在不同群体间的差异及指导基因相关遗传研究在不同群体间的开展。
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公开(公告)号:CN110819707B
公开(公告)日:2023-07-18
申请号:CN201911160967.5
申请日:2019-11-24
申请人: 中南大学湘雅医院
IPC分类号: C12Q1/6869 , C12Q1/6897 , C12N15/867 , C12N15/65
摘要: 本发明公开了一种针对多种来源细胞样本中内部核糖体结合位点(IRES)元件的高通量鉴定方法。利用针对mRNA链5’‑端帽子结构及3’‑端多聚腺苷酸尾巴设计的寡聚核苷酸通过逆转录从样本中获取全长的cDNA文库,利用TN5转座酶及所设计含特殊接头序列的核酸片段使cDNA文库片段化,利用含有红色荧光蛋白及绿色荧光蛋白及特殊元件的慢病毒报告基因质粒载体来筛选具有活性的IRES元件并排除翻译过程中造成的假阳性结果,利用长读长测序技术对活性IRES元件进行鉴定并排除转录过程中启动子及可变剪切造成的假阳性结果。所述方法将IRES元件的高通量鉴定推向临床应用,从而可对疾病发生发展过程中IRES元件所扮演的角色进行深入研究。
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