公开(公告)号：CN118956953A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202410839873.5

申请日：2024-06-26

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 熊娟 ,  尹飞 ,  彭镜 ,  曹小双 ,  陈施梦 ,  何芳 ,  邓小鹿 ,  段浩林 ,  张文

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  A01K67/0276 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及动物基因工程领域，具体涉及一种Kcna1基因敲除导致癫痫猝死的动物模型的构建方法及其应用。本发明采取的技术方案为：载体设计和构建；将构建好的sgRNA载体和Cas9载体进行体外转录；将sgRNA和Cas9mRNA共注射至C57BL/6N小鼠受精卵中；Cas9蛋白在sgRNA引导下结合到靶位点，造成DNA双链断裂，从而实现Kcna1基因的敲除。由此可得到国内首个经CRISPR/Cas9技术构建的Kcna1全基因敲除导致SUDEP的动物模型，为进一步研究其病理生理学机制及可能治疗靶点奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN117363658A

公开(公告)日：2024-01-09

申请号：CN202311359287.2

申请日：2023-10-19

Applicant: 中南大学湘雅医院

Inventor： 彭镜 ,  贺海兰 ,  王晓乐 ,  何芳 ,  尹飞 ,  林雪芹 ,  羊蠡 ,  熊娟

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0278

Abstract: 本发明提供了一种Clcn6基因变异相关早发性神经退行性疾病小鼠模型的构建方法与应用,属于生物医药技术领域。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Clcn6基因点突变小鼠模型，构建方法为：设计并体外转录gRNA，同时构建Donor vector，将Cas9、gRNA、Donor vector同时注射到小鼠的受精卵中，获得携带病人等位点突变的Clcn6基因p.E200A敲入小鼠模型；并进行基因型鉴定。本发明首次成功建立了携带病人等位点突变(p.E200A)的Clcn6基因敲入(Clcn6E200A/+)小鼠模型，且未检测到脱靶效应。Clcn6E200A/+小鼠模型不仅再现了CLCN6p.E200A病人临床症状，而且复刻了神经元蜡样脂褐素沉积症的临床表现和组织病理特点，为CLCN6基因变异相关疾病机制研究及药物研发提供了可靠的动物模型。