公开(公告)号：CN116144743A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202211621752.0

申请日：2022-12-16

申请人： 东华大学 ,  上海翼和应用生物技术有限公司

发明人： 肖君华 ,  路萌 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  巢凯悦 ,  任琴琴 ,  陈烨

IPC分类号： C12Q1/6858 ,  C12Q1/6876 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种基于多重长PCR结合高通量测序同时实现多个同源序列SNP分型的引物、试剂盒及方法。本发明通过跨过同源序列中SNP的侧翼序列(约200bp)，根据特定的引物设计原则设计特异性的多重长PCR扩增引物(2000‑3000bp)，扩增采用特异性和扩增效率较高的聚合酶并参考降落PCR反应条件做多重长PCR反应，多重长PCR产物可用于基于NGS测序平台的SNP分型鉴定。本发明的方法基于多重长PCR反应和巢式多重PCR反应，可同时实现对多个同源序列SNP精准分型，克服了KASP和三引物等位基因PCR技术通量小的缺点；相比于全基因测序，本发明只扩增目的序列，具有较低的成本和较高的性价比。

公开(公告)号：CN116144743B

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202211621752.0

申请日：2022-12-16

申请人： 东华大学 ,  上海翼和应用生物技术有限公司

发明人： 肖君华 ,  路萌 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  巢凯悦 ,  任琴琴 ,  陈烨

IPC分类号： C12Q1/6858 ,  C12Q1/6876 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种基于多重长PCR结合高通量测序同时实现多个同源序列SNP分型的引物、试剂盒及方法。本发明通过跨过同源序列中SNP的侧翼序列(约200bp)，根据特定的引物设计原则设计特异性的多重长PCR扩增引物(2000‑3000bp)，扩增采用特异性和扩增效率较高的聚合酶并参考降落PCR反应条件做多重长PCR反应，多重长PCR产物可用于基于NGS测序平台的SNP分型鉴定。本发明的方法基于多重长PCR反应和巢式多重PCR反应，可同时实现对多个同源序列SNP精准分型，克服了KASP和三引物等位基因PCR技术通量小的缺点；相比于全基因测序，本发明只扩增目的序列，具有较低的成本和较高的性价比。

公开(公告)号：CN118308470A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410287890.2

申请日：2024-03-13

申请人： 东华大学

发明人： 肖君华 ,  路萌 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  巢凯悦 ,  任琴琴 ,  陈烨

IPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12N15/10

摘要： 一种基于多重PCR和产物分选建库方法及磁珠分选方法及应用，涉及核酸检测领域。本发明采用极低循环数多重PCR对靶标区段进行扩增，提高了扩增子间的均一性；随后在扩增产物中添加Carry DNAs并进行两轮磁珠分选，此步骤避免了扩增产物大量丢失。最后通过PCR反应连接测序引物形成适合于NGS测序平台的扩增子。利用极低循环数的多重PCR，避免了高循环带来的扩增子间的不均一性和产生的大量引物二聚体；通过添加Carry DNAs的两轮磁珠分选能够避免扩增产物丢失，并提供有效的质量控制，方便后续实验。该技术是一种成本低廉，操作方便，适合于常规实验室的多重PCR扩增捕获建库方法。

公开(公告)号：CN112322710A

公开(公告)日：2021-02-05

申请号：CN202011223112.5

申请日：2020-11-05

申请人： 东华大学

发明人： 孙国祝 ,  肖君华 ,  陈烨 ,  路萌

IPC分类号： C12Q1/686 ,  C12N15/11

摘要： 本发明涉及一种端粒相对长度检测试剂盒。所述试剂盒包括：端粒基因引物序列，如SEQ ID NO.1‑2所示；内参基因引物序列，如SEQ ID NO.3‑4所示；探针序列，如SEQ ID NO.5所示；内参基因：多拷贝序列作为内参基因序列；标准品：永生化细胞系DNA。该试剂盒进行端粒长度检测效果稳定，原料廉价易得，实验操作简单、易行。