公开(公告)号：CN101598732A

公开(公告)日：2009-12-09

申请号：CN200910055081.4

申请日：2009-07-21

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 何培民 ,  柳俊秀 ,  胡乐琴 ,  王权 ,  李春霞

IPC: G01N33/577

Abstract: 本发明提供一种赤潮藻毒素软海绵酸OA的ELISA检测方法，它不但能快速、简便、灵敏地测定样品中OA的含量，而且成本低廉。本发明提供的ELISA检测方法，包括以下步骤：(1)包被抗原用碳酸盐缓冲液将其稀释为1∶2000后，包被酶标板；(2)洗板3次后封酶标板；(3)弃去封闭液，洗板，将稀释为系列浓度的OA标准溶液和贝类萃取液，分别与等体积的按1∶10000稀释的抗OA的单克隆抗体振摇混匀反应；(4)弃去残液，洗板，加入HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体，按1∶5000进行稀释，每孔100ul，37℃下保温1h；(5)弃去残液，洗板，加显色液，测各孔的OD450值。

公开(公告)号：CN101757608A

公开(公告)日：2010-06-30

申请号：CN200810207692.1

申请日：2008-12-25

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 何培民 ,  蔡春尔 ,  王源 ,  李春霞 ,  汪卿 ,  柳俊秀

IPC: A61K38/16 ,  A61K41/00 ,  A61P35/00

Abstract: 藻胆蛋白在制备以碘钨灯治咽喉癌细胞的光敏剂中的应用。本发明所指的藻胆蛋白是选择从条斑紫菜中提取的条斑紫菜藻红蛋白R-PE、条斑紫菜藻蓝蛋白C-PC，在碘钨灯下，对咽喉癌Hep-2细胞具有杀伤作用且有较高杀伤率，是一种有效的光敏剂。其来源丰富，价格低廉，提取工艺简单，采用碘钨灯作为光源且体积小巧、价格低廉、光源成本低，总之，利用条斑紫菜藻红蛋白R-PE或条斑紫菜藻蓝蛋白C-PC作为光敏剂，在碘钨灯下灭杀咽喉癌Hep-2细胞，可以大大降低在光动力治疗的过程中的使用成本，有利于广泛推广使用。

公开(公告)号：CN101726600A

公开(公告)日：2010-06-09

申请号：CN200910201244.5

申请日：2009-12-16

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 何培民 ,  柳俊秀 ,  蔡春尔 ,  汪卿 ,  饶涛

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/532 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明公开了一种腹泻性贝毒软海绵酸OA金标测试板条及其制备方法，提供了一种赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的快速胶体金免疫层析检测方法。本发明通过制备平均粒径30nm的胶体金，用以标记抗软海绵酸单克隆抗体；将软海绵酸半抗原与卵清蛋白的偶联物包被在硝酸纤维素膜上作为检测带，羊抗鼠二抗作为质控带，依据免疫竞争法原理，制备了快速检测腹泻性贝毒软海绵酸OA金标测试板条。本发明通过对胶体金的制备，胶体金的标记等等，多个条件的优化，大大提高了OA金标测试板条的检测速度。该方法灵敏度达25ng/mL，只需3-5min即可目测判断结果，可作为检验水产品贝类是否感染赤潮毒素并进行现场大量筛选的有效手段。

公开(公告)号：CN101750482A

公开(公告)日：2010-06-23

申请号：CN200810204718.7

申请日：2008-12-17

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 何培民 ,  蔡春尔 ,  周铭 ,  汪卿 ,  柳俊秀 ,  李春霞

IPC: G01N33/52 ,  G01N21/64

Abstract: 一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，特征是该方法在温度为20℃条件下进行以下各步骤：先以3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯与R-藻红蛋白摩尔比为40∶1进行R-藻红蛋白的衍生化，摇床避光低速振荡2小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集衍生化的R-藻红蛋白；再以二硫苏糖醇与抗体摩尔比为500∶1进行抗体的巯基化，摇床低速振荡1小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集巯基化的抗体；最后按衍生前R-藻红蛋白与抗体的质量比3∶5的比例取衍生化的R-藻红蛋白与巯基化的抗体混合，摇床低速震荡12小时，后加入100μl的N-乙基马来酰亚胺，反应30分钟，接着以Sephacryl S-300HR层析柱分离纯化，洗脱液为50mmol/L磷酸盐缓冲液+150mmol/L氯化纳、pH7.0，收集分离的交联产物，即为条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针。

公开(公告)号：CN101623505A

公开(公告)日：2010-01-13

申请号：CN200910055082.9

申请日：2009-07-21

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 何培民 ,  柳俊秀

IPC: A61K49/00

Abstract: 本发明涉及一种腹泻性贝毒素软海绵酸OA的小鼠生物学检测模型的建立，用于海洋生物检测领域。本发明使用封闭群昆明系小鼠，确定了腹泻性贝毒素对我国昆明小鼠的腹腔注射LD 50 ，建立了剂量-死亡时间曲线和剂量单位-中间死亡时间曲线以及剂量单位-中间死亡时间相关直线，这些为利用昆明系小鼠检测腹泻性贝毒素的普及应用奠定了基础。本发明用于检测OA的可靠性较强、成本低廉，应用范围广，能表达出样品中实际OA含量，而且不需要复杂设备，操作程序简便易行。