公开(公告)号：CN118126133A

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202410335172.8

申请日：2024-03-22

Applicant: 上海应用技术大学 ,  上海沪溶生物科技有限公司

Inventor： 徐毅 ,  高华美 ,  马宝娣 ,  吴小梅

IPC: C07K7/08 ,  C07K14/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12N9/84 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了提高青霉素G酰化酶活性表达的信号肽、重组菌株及其构建方法与应用。本发明通过计算筛选和实验验证，发现了能促进青霉素酰化酶在pET载体上高活性表达的新型信号肽序列，在将其替换青霉素酰化酶原始信号肽的基础上，构建了含新型信号肽的青霉素酰化酶基因工程菌，在此基础上建立了该基因工程菌高活性表达PGA的培养基组分和培养条件。在此条件下，菌种产酶活性超过了10000U/L，较原始菌株提高了37余倍。本发明获得较高的青霉素酰化酶活性表达，为后续的大规模生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN116949073A

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202310930033.5

申请日：2023-07-27

Applicant: 上海应用技术大学

Inventor： 徐毅 ,  谷心奥 ,  吴小梅 ,  马宝娣 ,  高峰 ,  高华美

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种假单胞菌水解脱卤酶的编码基因、表达所述假单胞菌水解脱卤酶的重组表达载体、表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌、基因工程菌的发酵培养方法和利用表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌制备法匹拉韦中间体的方法。假单胞菌水解脱卤酶基因序列如SEQ ID NO.1所示。与现有技术相比，本发明首次利用假单胞菌水解脱卤酶催化制备法匹拉韦中间体，并使假单胞菌水解脱卤酶基因能够在工程菌中实现高效表达。在优选条件下酶活性可以达到214.5U/L，催化制备法匹拉韦中间体效率高，底物转化率可达97.2％，具有较好的应用前景。