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公开(公告)号：CN106084019A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610277276.3
申请日：2016-05-01
Applicant: 上海大学
IPC: C07K14/415 , C07K1/14
Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳蛋白体的分离方法。步骤如下：将授粉20‑25天的新鲜玉米籽粒液氮研磨至粉末，重悬于溶液A(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl,5 mM MgCl2,7.2% sucrose,add 1 mM DTT,1mM PMSF and 罗氏混合蛋白酶抑制剂)，300 g离心30分钟去除细胞碎片，上清经2轮粗级不连续蔗糖密度梯度(1.0 M/L→1.5 M/L→2.0 M/L)离心，取1.5 M→2.0 M蔗糖界面的组分2倍溶液B(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl)稀释后，经2轮细级不连续蔗糖密度梯度(40% w/w → 45% → 50% → 55% → 60%)离心，取50%‑55%之间的组分2倍溶液B稀释后，经30‑60%连续密度梯度离心，收集第14层组分10倍溶液B稀释，13 000 rpm 离心15 min去除蔗糖后，得到高纯活性蛋白体。本方法提取纯度极高且保持生物活性，为利用蛋白体生物反应器生产活性物质提供了重要技术手段。
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公开(公告)号：CN103695550A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201310718089.0
申请日：2013-12-24
Applicant: 上海大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明涉及一种玉米Opaque1基因的分子标记及其应用。该分子标记是通过PCR扩增特异性引物，得到的一种共显性分子标记MYO-PD，所述的特异性引物为SEQIDNO.1～SEQIDNO.2所示的碱基序列。利用这个与o1基因完全连锁的分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中o1基因的存在与否以及杂合或纯合状态。同时，利用这个分子标记能区分突变体与10种国内主要育种亲本，能够在任何育种背景群体中准确检测到o1基因的存在，且错选率为0。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用o1基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。
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公开(公告)号：CN106084019B
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201610277276.3
申请日：2016-05-01
Applicant: 上海大学
IPC: C07K14/415 , C07K1/14
Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳蛋白体的分离方法。步骤如下：将授粉20‑25天的新鲜玉米籽粒液氮研磨至粉末，重悬于溶液A(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl,5 mM MgCl2,7.2%sucrose,add 1 mM DTT,1mM PMSF and罗氏混合蛋白酶抑制剂)，300 g离心30分钟去除细胞碎片，上清经2轮粗级不连续蔗糖密度梯度(1.0 M/L→1.5 M/L→2.0 M/L)离心，取1.5 M→2.0 M蔗糖界面的组分2倍溶液B(10 mM Tris‑HCl pH 8.5,10 mM KCl)稀释后，经2轮细级不连续蔗糖密度梯度(40%w/w→45%→50%→55%→60%)离心，取50%‑55%之间的组分2倍溶液B稀释后，经30‑60%连续密度梯度离心，收集第14层组分10倍溶液B稀释，13000 rpm离心15 min去除蔗糖后，得到高纯活性蛋白体。本方法提取纯度极高且保持生物活性，为利用蛋白体生物反应器生产活性物质提供了重要技术手段。
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公开(公告)号：CN103695550B
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310718089.0
申请日：2013-12-24
Applicant: 上海大学
Abstract: 本发明涉及一种玉米Opaque1基因的分子标记及其应用。该分子标记是通过PCR扩增特异性引物，得到的一种共显性分子标记MYO-PD，所述的特异性引物为SEQIDNO.1～SEQIDNO.2所示的碱基序列。利用这个与o1基因完全连锁的分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定，检测杂交育种子代各单株中o1基因的存在与否以及杂合或纯合状态。同时，利用这个分子标记能区分突变体与10种国内主要育种亲本，能够在任何育种背景群体中准确检测到o1基因的存在，且错选率为0。这种检测方法的准确性高，操作简单，为利用o1基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。
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