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公开(公告)号：CN1699578A
公开(公告)日：2005-11-23
申请号：CN200510026026.4
申请日：2005-05-20
Applicant: 上海中医药大学
Abstract: 本发明公开了一种转外源基因技术提高黄芪甲苷含量的方法。本发明将透明颤菌血红蛋白基因(vgb基因)经改造后，采用酶切结合PCR技术，将vgb基因插入质粒pBI121，获得以35s－CaMV强启动子为启动元件的中间表达载体pBI121－vgb，并转入大肠杆菌DH5α。采用三亲杂交法(pRK2013、DH5α和LBA9402)，获得转vgb基因的发根农杆菌LBA9402－vgb。用其侵染黄芪无茵苗，获得转基因黄芪毛状根，经测定其中黄芪甲苷含量高于未转基因毛状根含量5倍。
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公开(公告)号：CN100350046C
公开(公告)日：2007-11-21
申请号：CN200510026026.4
申请日：2005-05-20
Applicant: 上海中医药大学
Abstract: 本发明公开了一种转外源基因技术提高黄芪甲苷含量的方法。本发明将透明颤菌血红蛋白基因(vgb基因)经改造后，采用酶切结合PCR技术，将vgb基因插入质粒pBI121，获得以35s-CaMV强启动子为启动元件的中间表达载体pBI121-vgb，并转入大肠杆菌DH5α。采用三亲杂交法(pRK2013、DH5α和LBA9402)，获得转vgb基因的发根农杆菌LBA9402-vgb。用其侵染黄芪无菌苗，获得转基因黄芪毛状根，经测定其中黄芪甲苷含量高于未转基因毛状根含量5倍。
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公开(公告)号：CN1699566A
公开(公告)日：2005-11-23
申请号：CN200510026025.X
申请日：2005-05-20
Applicant: 上海中医药大学
IPC: C12N15/09 , C12N15/10 , C12N15/54 , C12N15/63 , C12N15/87 , C12N15/82 , C12N5/04 , C12N15/70 , C12N15/74 , A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种内源基因超量表达技术提高黄芪甲苷含量的方法。本发明将多糖代谢途径的两个代谢反应偶连的关键酶基因ugp基因(尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因)和gbss基因(腺苷二磷酸葡萄糖苷转移酶基因)，经体外修饰，增加强化表达的调控元件，构建成功中间载体，通过电穿孔法将表达中间载体pBI－UG转入发根农杆菌LBA－9402，获得转多糖合成双基因的黄芪毛状根。其中黄芪甲苷的含量比未转基因的黄芪毛状根高6倍。
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公开(公告)号：CN1314804C
公开(公告)日：2007-05-09
申请号：CN200510026025.X
申请日：2005-05-20
Applicant: 上海中医药大学
IPC: C12N15/09 , C12N15/10 , C12N15/54 , C12N15/63 , C12N15/87 , C12N15/82 , C12N5/04 , C12N15/70 , C12N15/74 , A01H4/00 , A61K36/481 , A61P9/10
Abstract: 本发明公开了一种内源基因超量表达技术提高黄芪甲苷含量的方法。本发明将多糖代谢途径的两个代谢反应偶连的关键酶基因ugp基因(尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因)和gbss基因(腺苷二磷酸葡萄糖苷转移酶基因)，经体外修饰，增加强化表达的调控元件，构建成功中间载体，通过电穿孔法将表达中间载体pBI-UG转入发根农杆菌LBA-9402，获得转多糖合成双基因的黄芪毛状根。其中黄芪甲苷的含量比未转基因的黄芪毛状根高6倍。
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