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公开(公告)号：CN118547002A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202411026440.4
申请日：2024-07-30
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
IPC分类号： C12N15/82 , C12N15/10 , A01H5/00 , A01H6/60 , C12Q1/6869
摘要： 本申请属于生物工程技术领域，具体涉及一种棉花靶向突变体库的构建方法。该方法包括：sgRNA载体文库的构建，载体文库通过茎尖转化法混合转化棉花，单株sgRNA信息鉴定和单株靶点的编辑效率鉴定。本申请利用棉花茎尖转化技术混合转化sgRNA载体文库，结合Sanger测序和Hi‑TOM测序的鉴定流程，在3~6个月时间内快速得到大量靶向突变的棉花突变体材料并完成鉴定工作。相比于传统的基于组织培养的棉花突变体建库技术，本发明的建库方式省时省力。有望代替组织培养成为棉花构建靶向突变体库的主流技术。
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公开(公告)号：CN118516384A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410760571.9
申请日：2024-06-13
申请人： 中国农业科学院棉花研究所 , 三亚中国农业科学院国家南繁研究院
摘要： 本申请属于生物工程技术领域，具体涉及一种重组酶激活的表达载体pRAGE及基于此的表达方法和相关应用。本发明构建了一个包括Bxb1重组酶表达框和35S启动子以及位于其下游的attP位点的表达载体pRAGE。该质粒可以用于辅助PCR扩增的基因片段在原生质体中表达。本发明相较于常规的需要构建重组载体进行基因表达的方法，节约了大量的时间和成本，同样适合高通量的筛选研究。因此该技术可以兼容多种原生质体表达系统的下游应用，包括但不限于蛋白亚细胞定位，蛋白功能位点筛选，蛋白互作关键区域/位点的筛选。
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公开(公告)号：CN118497224A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410971314.X
申请日：2024-07-19
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
IPC分类号： C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/84 , A01H5/02 , A01H5/10 , A01H5/00 , A01H6/82 , A01H6/20 , A01H6/60
摘要： 本发明提供了一种棉花GhSP2基因及其编码蛋白在调节植物开花中的应用。具体涉及到在棉花花芽分化前在棉花茎尖中持续表达的GhSP2基因，GhSP2蛋白定位在细胞膜和细胞核中，在棉花开花过程中发挥和重要的作用。本申请在拟南芥中过量表达GhSP2基因后，抽薹和开花显著推迟，而在棉花中将该基因沉默后，棉花植株的开花时间提前，同时株高变矮，表明该基因能够调控植物的开花时间。由此可知，基因GhSP2及其编码蛋白可以作为一种潜在的分子育种工具，通过调控棉花的开花时间，提高棉花品种对不同生态区的适应性。
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公开(公告)号：CN118497224B
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410971314.X
申请日：2024-07-19
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
IPC分类号： C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/84 , A01H5/02 , A01H5/10 , A01H5/00 , A01H6/82 , A01H6/20 , A01H6/60
摘要： 本发明提供了一种棉花GhSP2基因及其编码蛋白在调节植物开花中的应用。具体涉及到在棉花花芽分化前在棉花茎尖中持续表达的GhSP2基因，GhSP2蛋白定位在细胞膜和细胞核中，在棉花开花过程中发挥和重要的作用。本申请在拟南芥中过量表达GhSP2基因后，抽薹和开花显著推迟，而在棉花中将该基因沉默后，棉花植株的开花时间提前，同时株高变矮，表明该基因能够调控植物的开花时间。由此可知，基因GhSP2及其编码蛋白可以作为一种潜在的分子育种工具，通过调控棉花的开花时间，提高棉花品种对不同生态区的适应性。
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公开(公告)号：CN117363644A
公开(公告)日：2024-01-09
申请号：CN202311671520.0
申请日：2023-12-07
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及VIGS沉默效率报告质粒、评价沉默效率的方法及应用。本发明通过将植物内源基因片段与双荧光素酶载体中的LUC基因形成融合表达基因，并使用组成型启动子诱导其表达得到VIGS沉默效率报告质粒pVSr。将该质粒与病毒载体共转化原生质体，如果包含植物内源基因片段的病毒载体诱导VIGS产生，LUC值会下降。因此通过LUC/REN的酶活测定即可在1天内快速评价植物内源基因片段VIGS沉默效率。同时本发明还可以用于筛选促进或抑制植物VIGS的效应因子。因此本发明不仅可以用于VIGS实验，还可在原生质体的单细胞水平用于植物‑病毒互作以及植保等方向的研究。
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公开(公告)号：CN117363558A
公开(公告)日：2024-01-09
申请号：CN202311666003.4
申请日：2023-12-07
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
摘要： 本申请属于生物工程技术领域，具体涉及一种原生质体的制备方法和原生质体的转化方法及其应用。该方法以避光培养的棉花下胚轴为材料，利用酶裂解法获得原生质体细胞悬浮液，随后利用PEG介导的转化方法将外源基因高效转入棉花原生质体进行瞬时表达。本发明简化了棉花下胚轴原生质体分离、纯化和转化的相关步骤，极大减少了手动操作时间，可以在5小时内快速完成棉花原生质体的制备与转化，同时还能够快速获得高产率和高活力的原生质体，并应用于蛋白质定位与互作、基因组编辑工具开发等实验。本方法使棉花的下胚轴有望成为其它植物基因异源表达的首选平台。
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公开(公告)号：CN118497266A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410654825.9
申请日：2024-05-24
申请人： 中国农业科学院棉花研究所 , 三亚中国农业科学院国家南繁研究院
IPC分类号： C12N15/83
摘要： 本申请属于植物生物技术领域，具体涉及一种新型植物病毒载体及其应用。本发明从头载体化并开发了基于CCSV病毒的新型植物病毒载体。本申请中，发明人将CCSV病毒的两个基因组序列优化后放置在单一质粒中，构建了新型病毒质粒pVS3‑PDS。质粒中预留的多克隆位点可用于插入基因序列，在棉花中实现内源基因沉默和外源基因表达，因此可用于VIGS和VOX实验中。相比于棉花中常用的DNA病毒载体CLCrV的VIGS表型，CCSV具有沉默表型注射后一周左右就能观察到，大田的高温环境下沉默区域比较集中，叶脉和苞叶沉默效果明显等特点。因此本发明拓展了棉花中可用的病毒载体类型，有助于棉花的功能基因组学研究。
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公开(公告)号：CN118360307A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410092841.3
申请日：2024-01-23
申请人： 中国农业科学院棉花研究所 , 三亚中国农业科学院国家南繁研究院
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种移码编辑报告质粒、评价移码编辑效率的方法及应用。本发明通过将植物内源基因片段与双荧光素酶载体中的LUC基因形成融合表达基因得到移码编辑报告质粒pGEr，将该质粒与基因编辑质粒共转化细胞，如果基因编辑质粒能使内源基因产生移码突变，则同样会使报告质粒中的LUC基因产生移码突变，LUC值下降。因此通过LUC/REN的酶活测定即可在2天内快速判断基因编辑工具的移码编辑效率。本发明不仅能够用于筛选促进或抑制基因编辑的效应因子，还可以轻易的进行高通量的筛选实验。进而应用于优化移码编辑器优化以及新型基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN117230109B
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202311522978.X
申请日：2023-11-16
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
摘要： 本申请属于生物工程技术领域，具体涉及代替荧光蛋白的可视化质粒及其相关应用。本发明提供的三个质粒转化进入原生质体后表达的基因，可以代谢底物L‑DOPA，使原生质体细胞产生肉眼可见的甜菜红素或甜菜黄素。这两种色素在光学显微镜下肉眼可见，可以直观判断原生质体转化实验是否成功。本发明提供地质粒能稳定指示转化成功的细胞，且自发光强度优于红色荧光蛋白tdtomato和EGFP，能完美的代替荧光蛋白在评价原生质体转化效率中的作用。该技术的出现极大简化原生质体转化实验，摆脱荧光光源的依赖，降低原生质体转化技术的使用门槛。
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公开(公告)号：CN117286178A
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202311569075.7
申请日：2023-11-23
申请人： 三亚中国农业科学院国家南繁研究院 , 中国农业科学院棉花研究所
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种双组份病毒载体的简化构建方法及其相关应用。本发明针对双组份植物病毒载体进行了优化，使双组份的病毒基因组放置在单一质粒中。单一质粒的使用，避免了辅助菌的活化、重悬和混匀过程，简化了农杆菌实验阶段一半的工作量，避免了混菌过程中潜在的交叉污染风险，提高了病毒侵染性，因此极大简化了双组份病毒载体的使用。本发明能够通过串联多个病毒基因组实现更为复杂的基因操纵，因而更适用于构建VIGS突变体库以及基于VIF的大规模材料快速繁种等高通量应用。本发明还为其它双组份病毒载体的从头开发和应用提供了简化模版。
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